一、透射電鏡樣品超薄切片常規(guī)制作規(guī)程

  

1

．取材：根據(jù)實驗?zāi)康娜〔�，要求部位�?zhǔn)確，體積小于

2mm3  

2

．醛類固定：用

2%-3%

的戊二醛固定

2

小時；

  

3

．清洗：用磷酸緩沖液清洗

3

次，每次

10min

；

  

4

．鋨酸固定：用

1%-2%

的鋨酸固定

2~3

小時；

  

5

．清洗：用磷酸緩沖液清洗

3

次，每次

10 min

；

  

6

．脫水：用

50%

、

70%

、

80%

、

90%

乙醇梯度脫水各

15min

，再用

100%

乙醇脫水

3

次，每次

30min

；

   

7

．置換：用環(huán)氧丙烷或丙酮置換

3

次，每次

30min;  

8.

浸漬：

10hr

以上，浸漬過程如下：

  

①丙酮：包埋劑

=3

：

1

的浸漬液浸漬（動物樣品

1hr

，植物樣品

2~3hr

）

；

  

②丙酮：包埋劑

=1

：

1

的浸漬液浸漬（動物樣品

1hr

，植物樣品

2~3hr

）

；

  

③丙酮：包埋劑

=1

：

3

的浸漬液浸漬（動物樣品

4hr

，植物樣品

12~24hr

）

；

  

④純包埋劑浸漬（動物樣品

4hr

，植物樣品

12~24hr

）

；

  

9

．包埋：將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中；

  

包埋劑配方中

Epon812

，

MNA

，

DDSA

，

DMP-30

的比例見附表

  

10

．

 

聚合：將包埋板置于

40C

、

60

℃條件下各聚合

48hr

；

  

11

．修塊：將包埋頭修成梯形，且樣品表面積小于

0.2mm×0.2mm 

 

12

．超薄切片：切片厚度

50-90nm  

13

．染色：鈾染色

   5~15min   

清洗

  

鉛染色

   5~10min   

清洗

 

 

二、掃描電鏡樣品常規(guī)制備規(guī)程

  

1

．取材：根據(jù)實驗?zāi)康娜〔�，要求部位�?zhǔn)確

  

2

．清洗：用磷酸緩沖液反復(fù)清洗樣品表面的灰塵、雜質(zhì)等附著物

  

3

．固定：用

2%-3%

的戊二醛固定

2

小時

  

4

．清洗：用磷酸緩沖液清洗

3

次，每次

10 min  

5

．脫水：用

50%

、

70%

、

80%

、

90%

乙醇梯度脫水各

15min

，再用

100%

乙醇脫水

3

次，每次

30min

；

  

6

．置換：用叔丁醇置換

3

次，每次

30min  

7

．干燥：用冷凍干燥儀干燥樣品

  

8

．粘樣：用雙面膠帶將樣品粘到樣品臺上

  

9

．鍍膜：用離子濺射儀給樣品鍍

10nm

金膜