外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內含物（包括核酸、蛋白和脂質等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同時也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細胞都能分泌外泌體，但是不同細胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內含物中都具有比較大的差異性，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞，調控細胞生理活動。同時，外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進瘤子發(fā)生和轉移等作用；此外，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。1983年，外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)。海洋生物外泌體tmt

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉移準備轉移前微環(huán)境。用肺轉傾向的肉瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉傾向的肉瘤細胞重新定向。外泌體的蛋白質組學分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達譜，整合素α6β4和α6β1與肺轉有關，而整合素αvβ5與肝轉有關。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取，進而分別降低了肺和肝的轉移。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預測肉瘤轉移的部位傾向性的診斷指標。華盈外泌體疾病的進展和對診療的反應可以通過外泌體的多組分分析來確定。

全轉錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉錄出來的所有RNA，主要為mRNA和lncRNA、circRNA等非編碼RNA。外泌體中攜帶有來自母本細胞的多種蛋白質、脂類、短鏈RNA和長鏈RNA等重要信息。對外泌體中的長鏈RNA進行全轉錄組測序及分析，不只能夠篩選外泌體攜帶的特異Biomarker，同時對深入了解疾病或不同發(fā)育階段的內在機制也有重要意義。外泌體全轉錄組測序體系，充分結合了微量核酸建庫技術、NGS技術和全新的生物信息序列比對算法，可實現(xiàn)對1mL血漿中的外泌體即可進行mRNA、lncRNA和circRNA等RNAs充分測序，獲取周全的外泌體轉錄組信息。

外泌體的提取分離方法：1、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質，利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。

為什么超速離心提取外泌體看不到沉淀？答：這種問題通常有三種可能性，其一：使用的細胞上清或者血清量太低，從而造成了這樣的結果。其二：使用了不透明的超速離心管，一般來說外泌體產量都比較小，所以凡是不透明的管子，基本都是比較難見到明顯沉淀的，可以當做有沉淀，然后操作下去即可。其三：使用了角轉。部分品牌離心機的角轉管壁粘附性比較低，超離結束沒多久沉淀就會滑落下去，所以請在離心結束時趕緊去收樣。外泌體的角色：1、外泌體發(fā)揮功能并一定需要受體細胞攝入外泌體：外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用，活躍細胞內通路。2、外泌體的角色之一：細胞-細胞通訊，比如抗原遞呈。采用磁珠法時，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。成都外泌體lncRNA芯片

外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)。海洋生物外泌體tmt

外泌體的臨床應用：間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型，它具有自我更新，多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節(jié)、來源普遍等特點，在臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能，包括修復與再生組織、阻止炎癥反應及調節(jié)機體免疫，但外泌體相對于間充質干細胞又有許多優(yōu)勢。首先，間充質干細胞來源外泌體更穩(wěn)定，更好保存，易于管理和控制，可以人為改變其內容物的種類和數(shù)量。其次，它們沒有活細胞，不會像間充質干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重；另外，它有可能避免某些針對間充質干細胞的調控問題，間充質干細胞來源外泌體有代替間充質干細胞的趨勢。干細胞外泌體攝取流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。海洋生物外泌體tmt

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