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上海非侵入式成像紡錘體提高冷凍保存效率

來源: 發(fā)布時(shí)間:2025-04-08

秋水仙素會(huì)使動(dòng)物細(xì)胞染色體加倍嗎微管蛋白按照來源可分為植物微管蛋白和動(dòng)物腦蛋白。因植物微管蛋白難以制備,秋水仙堿與動(dòng)物腦微管蛋白結(jié)合反應(yīng)研究得要更多一些。秋水仙堿是從植物秋水仙中提純出的一種生物堿,又名秋水仙素,構(gòu)成微管的α、β微管蛋白異源二聚體是秋水仙素分子的結(jié)合靶點(diǎn)。當(dāng)秋水仙堿與正在進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞接觸時(shí),秋水仙堿結(jié)合到微管蛋白的特定位點(diǎn),導(dǎo)致α微管蛋白與β微管蛋白二聚體結(jié)構(gòu)變形,從而阻斷微管蛋白組裝成微管,但并不影響微管蛋白的解聚,所以紡錘體會(huì)迅速消失。秋水仙堿的濃度和作用時(shí)間對(duì)動(dòng)、植物細(xì)胞染色體加倍的影響是關(guān)鍵。有研究結(jié)果表明,在花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂細(xì)線期與粗線期進(jìn)行美洲黑楊2n花粉的誘導(dǎo)效果比較好,總體上在減數(shù)分裂粗線期進(jìn)行誘導(dǎo)得到的2n花粉**多,并且誘導(dǎo)的比較好濃度為0.5%。劉愛生等在利用人類外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行染色體G顯帶制作中,在阻斷培養(yǎng)的4h內(nèi)任意時(shí)間加入相應(yīng)劑量的秋水仙素,能獲得用于G顯帶的形態(tài)完好、大小適中、分散均勻、輪廓清楚的中期染色體標(biāo)本相。陳長(zhǎng)超等利用秋水仙堿處理MⅠ期卵母細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ml期紡錘體發(fā)生解聚,染色體周圍紡錘體微管全部消失或部分殘留,染色體排列異常。紡錘體的異常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分裂錯(cuò)誤,進(jìn)而引發(fā)染色體不穩(wěn)定性和遺傳性疾病。上海非侵入式成像紡錘體提高冷凍保存效率

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無需染色紡錘體觀察技術(shù)能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化,從而準(zhǔn)確評(píng)估冷凍保存的效果。通過對(duì)比冷凍前后紡錘體的形態(tài)和穩(wěn)定性,研究者可以優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方和濃度,以及改進(jìn)冷凍程序,減少冷凍損傷,提高解凍后卵母細(xì)胞的存活率和發(fā)育潛能。解凍后的卵母細(xì)胞在無需染色的情況下,可以直接通過Polscope系統(tǒng)進(jìn)行紡錘體觀察。這一技術(shù)能夠迅速評(píng)估解凍后卵母細(xì)胞的質(zhì)量,包括紡錘體的形態(tài)、位置、穩(wěn)定性等關(guān)鍵指標(biāo),為后續(xù)的受精和胚胎發(fā)育提供重要參考。香港紡錘體實(shí)時(shí)成像紡錘體卵冷凍研究紡錘體的微管在細(xì)胞分裂后期會(huì)斷裂并重新組裝,形成新的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

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哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的紡錘體由微管組成,這些微管結(jié)構(gòu)精細(xì)且高度動(dòng)態(tài),對(duì)溫度、滲透壓和機(jī)械力等外界因素極為敏感。在冷凍過程中,紡錘體容易因冰晶形成、滲透壓變化或機(jī)械損傷而遭到破壞,導(dǎo)致染色體分離異常,進(jìn)而影響卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力和受精后的胚胎質(zhì)量。選擇合適的冷凍保護(hù)劑是減少紡錘體損傷的關(guān)鍵。然而,不同濃度的冷凍保護(hù)劑對(duì)紡錘體的影響各異,且不同哺乳動(dòng)物種類之間也存在差異。因此,需要通過大量實(shí)驗(yàn)來優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方,以大限度地保護(hù)紡錘體的完整性。

    神經(jīng)退行性疾病是一類以神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞功能障礙和死亡為主要特征的疾病,包括阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)、帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)、亨廷頓?。℉untington'sdisease,HD)等。近年來,研究表明紡錘體功能障礙在神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。阿爾茨海默病是最常見的神經(jīng)退行性疾病之一,其主要病理特征是淀粉樣蛋白(Aβ)沉積和tau蛋白過度磷酸化形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)。研究表明,紡錘體功能障礙在阿爾茨海默病的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。 紡錘體微管的動(dòng)態(tài)不穩(wěn)定性是其功能的基礎(chǔ)。

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    盡管紡錘體在有絲分裂與減數(shù)分裂中的作用有所不同,但兩者也存在一些共性。首先,紡錘體的形成都依賴于中心體的復(fù)制和分離,以及微管的動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)和縮短。其次,在有絲分裂和減數(shù)分裂的中期,染色體都排列在赤道板上,形成了清晰的紡錘體結(jié)構(gòu)。此外,在有絲分裂和減數(shù)分裂的后期,染色體的著絲點(diǎn)都一分為二,導(dǎo)致姐妹染色單體或同源染色體分離,分別移向細(xì)胞的兩極。這一過程確保了每個(gè)子細(xì)胞都能獲得完整的染色體組。盡管紡錘體在有絲分裂與減數(shù)分裂中存在共性,但兩者也存在明顯的差異。 紡錘體在細(xì)胞分裂末期逐漸解體,為細(xì)胞質(zhì)分裂做準(zhǔn)備。香港卵母細(xì)胞紡錘體價(jià)格

紡錘體的異常也是疾病發(fā)生和發(fā)展的一個(gè)重要因素。上海非侵入式成像紡錘體提高冷凍保存效率

    微管重組技術(shù)是體外構(gòu)建紡錘體模型的基礎(chǔ)。通過在體外重組微管蛋白,可以形成類似于細(xì)胞內(nèi)紡錘體的微管結(jié)構(gòu)。常見的方法包括:從牛腦或其他來源中純化微管蛋白,確保其純度和活性。在體外條件下,通過控制溫度、離子濃度等參數(shù),誘導(dǎo)微管蛋白組裝成微管。使用微管穩(wěn)定劑(如紫杉醇)或調(diào)節(jié)蛋白(如MAPs)穩(wěn)定微管結(jié)構(gòu),模擬細(xì)胞內(nèi)的微管動(dòng)態(tài)變化。動(dòng)力蛋白和調(diào)節(jié)蛋白是紡錘體功能的重要組成部分。通過在體外模型中添加這些蛋白,可以模擬紡錘體的動(dòng)力學(xué)行為。常見的方法包括:添加動(dòng)力蛋白(如dynein、kinesin)以模擬微管的運(yùn)動(dòng)和動(dòng)力學(xué)行為。添加調(diào)節(jié)蛋白(如AuroraB、Mad2)以模擬紡錘體檢查點(diǎn)的功能。 上海非侵入式成像紡錘體提高冷凍保存效率

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