無需染色紡錘體觀察技術(shù)能夠?qū)崟r監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化，從而準(zhǔn)確評估冷凍保存的效果。通過對比冷凍前后紡錘體的形態(tài)和穩(wěn)定性，研究者可以優(yōu)化冷凍保護劑的配方和濃度，以及改進(jìn)冷凍程序，減少冷凍損傷，提高解凍后卵母細(xì)胞的存活率和發(fā)育潛能。解凍后的卵母細(xì)胞在無需染色的情況下，可以直接通過Polscope系統(tǒng)進(jìn)行紡錘體觀察。這一技術(shù)能夠迅速評估解凍后卵母細(xì)胞的質(zhì)量，包括紡錘體的形態(tài)、位置、穩(wěn)定性等關(guān)鍵指標(biāo)，為后續(xù)的受精和胚胎發(fā)育提供重要參考。紡錘體的微管從中心體向外輻射，形成紡錘狀結(jié)構(gòu)。深圳輔助生殖紡錘體Oosight Meta

紡錘體是如何形成的(1)紡錘體是動植物細(xì)胞分裂期形成的與染色體正常分離直接相關(guān)的分裂器，紡錘體的裝配在有絲分裂的前期完成。動物細(xì)胞紡錘體由星體微管、極間微管、動粒微管及其結(jié)合蛋白構(gòu)成，因含有星體微管故稱有星紡錘體。無中心體的動物細(xì)胞和植物細(xì)胞也能形成紡錘體，因不含有星體微管而稱之為無星紡錘體。微管是由α、β微管蛋白異源二聚體及少量微管結(jié)合蛋白聚合而成的亞穩(wěn)定動態(tài)結(jié)構(gòu)。動物細(xì)胞的中心體由一對相互垂直的圓筒狀中心粒及中心體基質(zhì)構(gòu)成。它是紡錘體微管向外生長的**，又稱微管組織中心。在有絲分裂前間期的S期初期，中心體開始復(fù)制倍增，在G2期結(jié)束時完成。在細(xì)胞分裂期前期，間期復(fù)制倍增的兩個中心體分離，每一個中心體形成放射狀排列的微管，稱為星體，每個中心體是它自身星體的**。在有絲分裂細(xì)胞周期的分裂期，微管通過持續(xù)增加和丟失組成微管的微管蛋白亞基來實現(xiàn)微管的聚合和解聚，微管始終處于生長和縮短的更替中。在分裂前期，紡錘體微管由游離的微管蛋白組裝而成，介導(dǎo)染色體的運動；分裂末期，紡錘體微管解聚，又組裝形成細(xì)胞質(zhì)微管網(wǎng)絡(luò)。紡錘體微管包括動粒微管、極間微管和星體微管.北京克隆紡錘體提高冷凍保存效率紡錘體微管的微妙調(diào)整，確保了遺傳信息在細(xì)胞分裂中的準(zhǔn)確無誤傳遞。

玻璃化冷凍技術(shù)因其快速冷凍和解凍的特點，在哺乳動物紡錘體卵冷凍保存中展現(xiàn)出巨大優(yōu)勢。該技術(shù)通過極快的降溫速率和高濃度的冷凍保護劑，使細(xì)胞內(nèi)溶液在冷凍過程中呈玻璃態(tài)而非結(jié)晶態(tài)，從而避免了冰晶對紡錘體的損傷。此外，研究者們還嘗試將微流控技術(shù)、激光輔助冷凍等新技術(shù)應(yīng)用于卵母細(xì)胞的冷凍保存中，以進(jìn)一步提高冷凍效果。為了準(zhǔn)確評估冷凍對紡錘體的影響，研究者們開發(fā)了多種紡錘體穩(wěn)定性評估技術(shù)。例如，通過偏光顯微鏡觀察紡錘體的形態(tài)變化；利用免疫熒光染色技術(shù)檢測紡錘體相關(guān)蛋白的分布和表達(dá)；以及通過分子生物學(xué)方法檢測紡錘體相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平等。這些技術(shù)的應(yīng)用為深入研究冷凍過程中紡錘體的變化提供了有力支持。

冷凍與解凍過程中涉及多個環(huán)節(jié)，包括溫度控制、時間控制、冷凍保護劑的添加與去除等。這些環(huán)節(jié)中的任何一步操作不當(dāng)都可能導(dǎo)致紡錘體損傷。因此，需要不斷優(yōu)化冷凍與解凍技術(shù)，以減少對紡錘體的不良影響。近年來，研究者們通過不斷嘗試和優(yōu)化冷凍保護劑的配方，取得了進(jìn)展。例如，甘油、二甲基亞砜（DMSO）等滲透性保護劑被用于哺乳動物卵母細(xì)胞的冷凍保存中，它們能夠迅速降低細(xì)胞內(nèi)水分含量，減少冰晶形成。同時，一些非滲透性保護劑如蔗糖、海藻糖等也被發(fā)現(xiàn)對紡錘體具有一定的保護作用。紡錘體微管網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性確保了細(xì)胞分裂的精確性和高效性。

紡錘體缺陷可以分為多種類型，包括但不限于：微管動力學(xué)異常：微管的聚合和解聚速率異常，導(dǎo)致紡錘體結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。動粒功能障礙：動粒與微管的結(jié)合能力下降，影響染色體的正確捕捉和分離。紡錘體檢查點失效：紡錘體檢查點（spindleassemblycheckpoint,SAC）是確保染色體正確分離的重要機制，其失效會導(dǎo)致染色體分離錯誤。染色體分離異常：染色體在分裂過程中未能正確分離，導(dǎo)致非整倍體的形成。微管的動態(tài)變化是紡錘體功能的關(guān)鍵，任何影響微管聚合和解聚的因素都會導(dǎo)致紡錘體結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定。例如，某些藥物（如紫杉醇）可以穩(wěn)定微管，但過量使用會導(dǎo)致微管過度穩(wěn)定，影響紡錘體的正常功能。紡錘體在細(xì)胞分裂后期推動染色體向細(xì)胞兩極移動。昆明無損觀察紡錘體Hoechst染料

紡錘體的形成和功能與細(xì)胞的周期調(diào)控密切相關(guān)。深圳輔助生殖紡錘體Oosight Meta

在生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，卵母細(xì)胞的冷凍保存技術(shù)一直是研究的熱點之一，旨在提高女性生育能力的保存與利用。然而，傳統(tǒng)紡錘體觀察方法往往需要對卵母細(xì)胞進(jìn)行固定和染色，這不僅破壞了細(xì)胞的活性，還限制了對其發(fā)育潛能的進(jìn)一步評估。傳統(tǒng)紡錘體觀察方法，如免疫熒光染色技術(shù)，雖然能夠清晰地展示紡錘體的形態(tài)，但其缺點在于需要對細(xì)胞進(jìn)行固定和染色處理，這一過程不可避免地會對細(xì)胞造成損傷，影響后續(xù)的實驗結(jié)果和臨床應(yīng)用。而Polscope偏振光顯微成像系統(tǒng)則通過利用紡錘體微管結(jié)構(gòu)的雙折射性，實現(xiàn)了對無需染色紡錘體的直接觀察。這一技術(shù)創(chuàng)新不僅保留了細(xì)胞的活性與完整性，還提高了觀察的實時性和動態(tài)性，為卵母細(xì)胞冷凍研究提供了更為準(zhǔn)確和可靠的評估手段。深圳輔助生殖紡錘體Oosight Meta