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湖北DIA定量蛋白質組學領域

來源: 發(fā)布時間:2022-01-26

定量蛋白質組學技術:定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)和非標記(labelfree)定量策略,標記策略又分為體內標記和體外標記兩種。細胞內蛋白質組豐度的動態(tài)變化對各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進程中,常常伴隨著某些蛋白質的表達異常。定量蛋白質組學就是把一個基因組表達的全部蛋白質或一個復雜的混合體系中所有的蛋白質進行精確的定量和鑒定。非標記(labelfree)的定量蛋白組學技術,Labelfree定量蛋白組學技術是通過液質聯(lián)用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內部標準,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質時所產生的質譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。蛋白質組學在生物學領域的研究中的應用是怎樣的?湖北DIA定量蛋白質組學領域

蛋白組學研究怎么做?PRM:平行反應監(jiān)測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術,能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現(xiàn)對目標蛋白質/肽段進行一定定量,因此也被稱之為基于液相色譜質譜聯(lián)用技術的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技術基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜平臺,首先利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對母離子進行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。深圳常規(guī)蛋白質組學主要技術蛋白質組可以隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變。

定量蛋白質組學分析:特點:(1)不同樣本標記之后混樣,統(tǒng)一處理上機,減少了分別上機造成的實驗誤差,并利用同位素標簽的豐度來檢測,定量更準確,重復性更好;(2)由于需要標記試劑標記,因此成本相對較高;(3)通量高,在一次實驗中比較多可同時比較8個樣品;(4)利用基于同一個參考樣品的辦法,可以進行多于8個樣品的定量比較;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質組學分析:Label-Free定量,即非標記的定量蛋白質組學,不需要對比較樣本做特定標記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產生的質譜數(shù)據(jù)。

定量蛋白質組學技術:TMT定量蛋白組學技術:TMT(TandemMassTags)定量蛋白質組學技術多肽體外標記定量技術。這種技術采用多個(2-10)穩(wěn)定同位素標簽,特異性標記多肽的氨基基團進行串聯(lián)質譜分析,能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質的相對含量,可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學技術是多肽體外標記定量技術。這種技術同TMT定量蛋白組學技術相似,可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。蛋白質組學研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。

定量蛋白質組學分析(QuantitativeProteomics)是對一個基因組表達的全部蛋白質或一個復雜混合體系內所有蛋白質進行精確鑒定和定量??捎糜诤Y選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達蛋白,結合生物信息學揭示細胞生理病理等功能,同時也可對某些關鍵蛋白進行定性和定量分析。目前定量蛋白質組學技術常見標記(Label)和非標記的(LabelFree)定量策略。定量蛋白質組學技術常見的幾類主要包括:LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學分析、SILAC/Dimethyl標記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白組學分析。蛋白質組學包括翻譯后的修飾。深圳常規(guī)蛋白質組學主要技術

iTRAQ定量是目前定量蛋白質組學應用比較普遍的技術。湖北DIA定量蛋白質組學領域

蛋白質組學發(fā)展趨勢:1、基礎研究方面:近兩年來蛋白質組研究技術已被應用到各種生命科學領域,如細胞生物學、神經(jīng)生物學等。在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍,涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等等。在未來的發(fā)展中,蛋白質組學的研究領域將更加普遍。2、應用研究方面:蛋白質組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標比較有效的方法之一。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質組技術也有十分誘人的前景,目前國際上許多大型藥物公司正投入大量的人力和物力進行蛋白質組學方面的應用性研究。湖北DIA定量蛋白質組學領域

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