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Label free非標記定量蛋白質組學研究內(nèi)容

來源: 發(fā)布時間:2022-02-09

蛋白質組學:常用技術:靶向蛋白組(PRM靶向蛋白/肽段定量),修飾蛋白組學(定量磷酸化修飾組學、定量糖基化修飾蛋白組學、定量乙?;揎椀鞍捉M學和定量泛素化修飾蛋白組學),互作蛋白組學(代謝物與蛋白互作研究)。什么樣本能做蛋白組學檢測?大概可以測到多少的蛋白種類?原則上只要能提取到蛋白,就可以做蛋白組檢測。樣本測到的蛋白種類跟數(shù)據(jù)庫和樣本本身蛋白濃度有關,一般數(shù)據(jù)庫越大,可以鑒定到的蛋白質數(shù)量越多。也與樣本的類型有關,通常,組織細胞相比于體液樣本,能夠鑒定到更多的蛋白。蛋白質組意指“一種基因組所表達的全套蛋白質”,即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。Label free非標記定量蛋白質組學研究內(nèi)容

蛋白質組學技術:蛋白質組學技術的發(fā)展已經(jīng)成為現(xiàn)代的生物技術快速發(fā)展的重要支撐,并將帶領生物技術取得關鍵性的突破。為幫助生命科學領域的工作者全方面掌握蛋白質組學的技術與方法、實驗難點與關鍵點、研究前沿與熱點,包括雙向凝膠電泳、等電聚焦、生物質譜分析及非凝膠技術。雙向凝膠電泳:雙向凝膠電泳的原理是第1向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離,第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離,把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上分開。由于雙向電泳技術在蛋白質組與醫(yī)學研究中所處的重要位置,它可用于蛋白質轉錄及轉錄后修飾研究,蛋白質組的比較和蛋白質間的相互作用,細胞分化凋亡研究,致病機制及耐藥機制的研究,療效監(jiān)測,新藥開發(fā),病癥研究,蛋白純度檢查,小量蛋白純化,新替代疫苗的研制等許多方面。近年來經(jīng)過多方面改進已成為研究蛋白質組的比較有使用價值的關鍵方法。濟南常規(guī)蛋白質組學報價蛋白質組學包括蛋白質的表達水平。

蛋白質組學:對人類而言,蛋白質組學的研究終究要服務于人類的健康,主要指促進分子醫(yī)學的發(fā)展。如尋找藥物的靶分子。很多藥物本身就是蛋白質,而很多藥物的靶分子也是蛋白質。藥物也可以干預蛋白質-蛋白質相互作用。在基礎醫(yī)學和疾病機理研究中,了解人不同發(fā)育、生長期和不同生理、病理條件下及不同細胞類型的基因表達的特點具有特別重要的意義。這些研究可能找到直接與特定生理或病理狀態(tài)相關的分子,進一步為設計作用于特定靶分子的藥物奠定基礎。

定量蛋白質組學分析(QuantitativeProteomics)是對一個基因組表達的全部蛋白質或一個復雜混合體系內(nèi)所有蛋白質進行精確鑒定和定量。可用于篩選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達蛋白,結合生物信息學揭示細胞生理病理等功能,同時也可對某些關鍵蛋白進行定性和定量分析。目前定量蛋白質組學技術常見標記(Label)和非標記的(LabelFree)定量策略。定量蛋白質組學技術常見的幾類主要包括:LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學分析、SILAC/Dimethyl標記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白組學分析。蛋白質組學技術的本質(從分析化學角度來看),就是對蛋白質的定性定量分析。

蛋白質組學技術:飛行時間質譜:MALDI的基本原理是將分析物分散在基質分子(尼古丁酸及其同系物)中并形成晶體,當用激光(337nm的氮激光)照射晶體時,基質分子吸收激光能量,樣品解吸附,基質-樣品之間發(fā)生電荷轉移使樣品分子電離。它從固相標本中產(chǎn)生離子,并在飛行管中測定其分子量,MALDI-TOF-MS一般用于肽質量指紋圖譜,非??焖伲看畏治鲋恍?~5min),靈敏(達到fmol水平),可以精確測量肽段質量,但是如果在分析前不修飾肽段,MALDI-TOF-MS不能給出肽片段的序列。蛋白質組學與其它學科的交叉也將日益明顯和重要。Label free非標記定量蛋白質組學研究內(nèi)容

蛋白質組學在醫(yī)療和健康方面有什么應用?Label free非標記定量蛋白質組學研究內(nèi)容

我們究竟怎么研究蛋白質組學呢?目前高通量檢測蛋白質的方法中,還是首推基于質譜的方法,納流液相可以將復雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進入質譜,對每個被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質比進行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據(jù)對應的色譜峰面積或者報告離子強度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學研究怎么做?當下蛋白組學研究中應用比較普遍的技術是同位素標記定量(iTRAQ/TMT技術)。iTRAQ/TMT技術是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級質譜信號比較強的Top20的多肽進行二級打碎,然后進入二級質譜進行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。Label free非標記定量蛋白質組學研究內(nèi)容

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