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北京蛋白質(zhì)氧化修飾組學主要方式

來源: 發(fā)布時間:2022-02-18

翻譯后修飾蛋白組學分析:蛋白質(zhì)組學的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質(zhì)表達水平變化,許多至關(guān)重要的生命進程不只由蛋白質(zhì)相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調(diào)控,因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質(zhì)復(fù)雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變,通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。同時,發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質(zhì)再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣,所以在質(zhì)譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質(zhì)或肽段進行富集。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性。北京蛋白質(zhì)氧化修飾組學主要方式

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質(zhì),其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活性、運輸和定位,而且在分子識別、細胞通信、信號轉(zhuǎn)導等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。四川泛素化修飾蛋白質(zhì)組學研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的功能。

蛋白翻譯后修飾:蛋白質(zhì)氨基酸序列的特定位置可以與化學基團或者小分子量的蛋白共價結(jié)合從而發(fā)生蛋白質(zhì)翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs)。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)生物合成的一個步驟,翻譯后多肽鏈在成為成熟的蛋白質(zhì)產(chǎn)品之前要經(jīng)過修飾,PTMs的類型包括磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化和二硫鍵等等,它導致蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的大幅增加。對于任何給定的蛋白質(zhì),各種各樣的PTMs提供了一種通過改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能來促進細胞快速變化的方法。PTMs在信號轉(zhuǎn)導、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和周轉(zhuǎn)率、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)識別和相互作用以及空間定位中起著至關(guān)重要的作用。

蛋白質(zhì)乙?;揎椊M學定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(zhì)(基于SILAC的乙?;揎椊M學定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學定量)。4. 使用高效特異性乙?;贵w對乙酰化修飾肽段進行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行序列分析。6. 數(shù)據(jù)分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對產(chǎn)生變化的生物學意義進行解釋。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾類型:根據(jù)磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質(zhì)分為4類,即O-磷酸鹽蛋白質(zhì)、N-磷酸鹽蛋白質(zhì)、酰基磷酸鹽蛋白質(zhì)和S-磷酸鹽蛋白質(zhì)。1、O-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 ?;姿猁}蛋白質(zhì)通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術(shù)是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的、根據(jù)特定抗原-抗體的特異性反應(yīng)來檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)的免疫生化分析方法。蛋白質(zhì)乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙酰化基團。貴州棕櫚?;揎椀鞍踪|(zhì)組學有哪些

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點分析時應(yīng)該注意些什么問題?北京蛋白質(zhì)氧化修飾組學主要方式

蛋白磷酸化修飾過程:蛋白磷酸化修飾這一過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、蘇氨酸,或酪氨酸殘基上。并且磷酸化修飾的過程是可逆的,去磷酸化反應(yīng)由蛋白磷酸酶催化完成。蛋白磷酸化檢測方法:Western Blot檢測方法:Western Blot是檢測蛋白磷酸化水平的常用方法,主要過程為先利用SDS-PAGE分離蛋白質(zhì),隨后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,然后使用特異性識別磷酸化蛋白的抗體來鑒定目標蛋白的磷酸化水平。只有被磷酸化修飾的蛋白才會在相應(yīng)分子質(zhì)量的地方顯現(xiàn)特異性蛋白條帶。北京蛋白質(zhì)氧化修飾組學主要方式

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