蛋白質(zhì)磷酸化修飾定義？在哺乳動物細(xì)胞生命周期中，大約有1/3的蛋白質(zhì)發(fā)生過磷酸化修飾，在脊椎動物基因中，約有5%的基因編碼的蛋白質(zhì)是參與磷酸化和去磷酸化過程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過激發(fā)、調(diào)節(jié)諸多信號通路進(jìn)而參與調(diào)控生物體的生長、發(fā)育、逆境應(yīng)激、疾病發(fā)生等多種生命過程，一直是生物學(xué)研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(tuán)（P04）轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上（主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y），從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過程。蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程。廣州棕櫚酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾自下而上分析策略：常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有：a. 凝集素親和技術(shù)；b. 肼化學(xué)富集；c. 親水性相互作用色譜法；d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?；谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點(diǎn)測定方法有：a. PNGase F酶法；b. Endo H酶法；c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化：泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽，在真核生物中高度保守，可通過異肽鍵與目標(biāo)蛋白賴氨酸殘基的氨基進(jìn)行共價連接。泛素化蛋白的富集主要基于標(biāo)記，泛素用親和標(biāo)簽（通常為6xHis）進(jìn)行標(biāo)記，并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu)，經(jīng)胰蛋白酶水解后，Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上，使肽的質(zhì)量增加114，因此可作為泛素定位位點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)記。用HPLC對樣品進(jìn)行預(yù)分離，使用針對特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽，可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點(diǎn)。河南乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)乙?；揎検求w內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。

翻譯后修飾蛋白組：翻譯后修飾蛋白組分析是指在組學(xué)水平上對存在翻譯后修飾的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析。翻譯后修飾蛋白組是指細(xì)胞或組織等整體水平上的翻譯后修飾蛋白。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾（Post Translational Modifications, PTMs）是蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程。蛋白翻譯后修飾通過在一個或多個氨基酸殘基上加修飾基團(tuán)或通過蛋白質(zhì)水解去基團(tuán)而改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的功能。經(jīng)過翻譯后修飾的蛋白質(zhì)稱為翻譯后修飾蛋白。目前，已知的蛋白質(zhì)翻譯后修飾主要包括糖基化、磷酸化、乙?；⒎核鼗?、二硫鍵配對、甲基化和亞硝基化等等。

蛋白質(zhì)乙?；揎椀墓δ埽耗壳皩σ阴；揎椀墓δ苎芯恐饕性趯?xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控，以及對代謝通路的調(diào)控這兩個方面。在眾多乙酰化修飾的蛋白質(zhì)中，研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了。組蛋白和DNA纏繞構(gòu)成核小體，組蛋白的甲基化、乙?；揎椖軌蛘{(diào)節(jié)DNA纏繞的松緊度，從而對基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，因此，組蛋白的翻譯后修飾是表觀遺傳學(xué)研究中的重要一環(huán)。另外，研究也發(fā)現(xiàn)乙酰化修飾普遍存在于人的多種代謝酶之中，并且參與調(diào)控代謝通路以及代謝酶的活性。其中在肝臟這樣的代謝中就存在著多種代謝酶被高度乙?；?。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性。

蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)技術(shù)：乙?；揎検求w內(nèi)保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾，對細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著重要的作用。此外，還存在的非組蛋白乙酰化修飾參與了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響，再結(jié)合免疫共沉淀通過抗體富集乙?；碾亩危瑥亩鴮?shí)現(xiàn)乙?；蔫b定及定量。樣品要求：1、SDS-PAGE條帶：5個以上可見考染條帶。2、溶液（目標(biāo)蛋白質(zhì)）：目標(biāo)蛋白總量>50μg，目標(biāo)蛋白濃度>80%。3、溶液（大規(guī)?；旌系鞍踪|(zhì)）：蛋白總量>1mg，蛋白濃度>1μg/μl。蛋白質(zhì)糖基化是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。廣州棕櫚酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析研究

蛋白質(zhì)的翻譯后修飾調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級結(jié)構(gòu)的變化。廣州棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析研究

翻譯后修飾蛋白組分析：蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個細(xì)胞過程的重要方式，幾乎在每個細(xì)胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計量和豐度存在，這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時對其的檢測。因此，要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白，純化方法是必要的，以分離修飾蛋白和肽段，然后再進(jìn)行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行，可以對翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。廣州棕櫚?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)分析研究

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