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河南定量蛋白組學質(zhì)譜鑒定

來源: 發(fā)布時間:2022-03-08

蛋白質(zhì)組(Proteome)的概念指由一個基因組(genome),或一個細胞、組織表達的所有蛋白質(zhì)(Protein).蛋白質(zhì)組的概念與基因組的概念有許多差別,它隨著組織、甚至環(huán)境狀態(tài)的不同而改變.在轉(zhuǎn)錄時,一個基因可以多種mRNA形式剪接,并且,同一蛋白可能以許多形式進行翻譯后的修飾.故一個蛋白質(zhì)組不是一個基因組的直接產(chǎn)物,蛋白質(zhì)組中蛋白質(zhì)的數(shù)目有時可以超過基因組的數(shù)目.蛋白質(zhì)組學(Proteomics)處于早期“發(fā)育”狀態(tài),這個領(lǐng)域的**否認它是單純的方法學,就像基因組學一樣,不是一個封閉的、概念化的穩(wěn)定的知識體系,而是一個領(lǐng)域.蛋白質(zhì)組學集中于動態(tài)描述基因調(diào)節(jié),對基因表達的蛋白質(zhì)水平進行定量的測定,鑒定疾病、藥物對生命過程的影響,以及解釋基因表達調(diào)控的機制.作為一門科學。蛋白質(zhì)組學研究的首要任務是建立獲取和分析蛋白質(zhì)的常規(guī)、可靠、有效的技術(shù)。河南定量蛋白組學質(zhì)譜鑒定

定量蛋白質(zhì)組學方法學介紹:iTRAQ:iTRAQ定量是目前定量蛋白質(zhì)組學應用比較普遍的技術(shù),該技術(shù)的關(guān)鍵原理是多肽標記和定量,將多肽的含量轉(zhuǎn)化為114、115、116和117同位素的含量(或113、114、115、116、117、118、119和121的8標記),從而簡化了定量的復雜性,然后通過多肽定量值回歸到蛋白的定量值,從而測定出不同樣本之間蛋白質(zhì)的差異。iTRAQ定量不依賴樣本,可檢測出較低豐度蛋白,胞漿蛋白、膜蛋白、胞外蛋白等,且定量準確,可同時對8個樣本進行分析,并可同時得出鑒定和定量的結(jié)果,特別適用于采用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析。南京PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學主要技術(shù)蛋白質(zhì)組學技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學角度來看),就是對蛋白質(zhì)的定性定量分析。

蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙酰化等等,也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模,既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量,也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達量與實際對應蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,經(jīng)過平均后r值只為0.4。

定量蛋白質(zhì)組學方法學介紹:Label-free:Label-free定量,即非標記的定量蛋白質(zhì)組學,不需要對比較樣本做特定標記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。Label-free定量不需要標記處理,操作簡單,可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,但對實驗操作的穩(wěn)定性、重復性要求較高,準確性也較標記定量差。因此,Label-free技術(shù)適合于大樣本量的定量比較,以及對無法用標記定量實現(xiàn)的實驗設(shè)計。蛋白質(zhì)組學是以蛋白質(zhì)組為研究對象,研究細胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學。

Labelfree非標記定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)特點:(1)不需要標記處理,操作簡單,成本低、實驗周期短;(2)每個樣品單獨處理、上機;(3)可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,樣品類型不受限制;(4)對單個樣品的蛋白總量要求相對較低,對于組織本身蛋白量不高,可以選擇Label-Free,適用于一些難收集樣品;(5)定性沒有問題,但是定量的準確性較標記定量稍差,會受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響;(6)適合于大樣本量的定量比較(大于24個樣本)。蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)涉及到各種重要的生物學現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導、細胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。河南新型修飾蛋白組學價格

蛋白質(zhì)組學包括蛋白質(zhì)的表達水平。河南定量蛋白組學質(zhì)譜鑒定

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