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深圳SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析

來源: 發(fā)布時間:2022-03-22

什么叫轉(zhuǎn)錄組學(xué)?廣義轉(zhuǎn)錄組是指生命單元(通常是一種細(xì)胞)中所有按基因信息單元轉(zhuǎn)錄和加工的RNA分子(包括編碼和非編碼RNA功能單元),或者是一個特定細(xì)胞所有轉(zhuǎn)錄本的總和.它的研究對象就是這些RNA與蛋白質(zhì)分子和它們所組成的基因功能網(wǎng)絡(luò)以及它們與細(xì)胞功能的關(guān)系.而狹義轉(zhuǎn)錄組是指可直接參與翻譯蛋白質(zhì)的mRNA總和.研究生物細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄組的發(fā)生和變化規(guī)律的科學(xué)就稱為轉(zhuǎn)錄組學(xué)(tran—scriptomics)。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序可對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進(jìn)行檢測。深圳SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析

轉(zhuǎn)錄組及轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq):轉(zhuǎn)錄組即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)主要通過高通量測序研究特定組織或細(xì)胞在某個時期轉(zhuǎn)錄出來的mRNA的表達(dá)量,進(jìn)而對相關(guān)基因和表型的關(guān)系進(jìn)行分析。本質(zhì)上講RNA-seq就是在用一種新的方法實現(xiàn)“基因決定性狀”的經(jīng)典思路。在RNA-seq之前用于研究基因組表達(dá)分析的主要技術(shù)是基因芯片,不過由于高通量測序成本的下降,RNA-seq的運用愈來愈普遍。杭州全轉(zhuǎn)錄學(xué)組研究方法轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)基本概念:普通轉(zhuǎn)錄組的思路也可以應(yīng)用到單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組。普通轉(zhuǎn)錄組相當(dāng)于把一群細(xì)胞混合到一起去提取RNA,獲得的是每個細(xì)胞中RNA表達(dá)量的平均值。單細(xì)胞是把每個細(xì)胞單獨分出來去提取RNA,然后建庫測序,獲得是是單個細(xì)胞的表達(dá)值。在每個細(xì)胞里面基因的表達(dá)具有隨機性,且存在異質(zhì)性。而且這些細(xì)胞群中會存在不同類型的細(xì)胞,尤其是當(dāng)我們對整個組織進(jìn)行測序時,它們本身就是由不同類型的細(xì)胞組成的,而我們用普通轉(zhuǎn)錄組來測序,相當(dāng)于掩蓋住了這些不同的細(xì)胞類型的差異,展示的是整個組織的平均的狀態(tài),所以說單細(xì)胞從這個來看跟普通轉(zhuǎn)錄組就不同在是用一個細(xì)胞測,不是用一堆細(xì)胞測。

轉(zhuǎn)錄組學(xué):隨著越來越多的基因組序列相繼被測定,生命科學(xué)的研究進(jìn)入了后基因組時代,各類組學(xué)技術(shù)得到迅速地發(fā)展與普遍地應(yīng)用包括以基因為研究對象的基因組學(xué)(Genomics)、以轉(zhuǎn)錄過程為研究對象的轉(zhuǎn)錄組學(xué)(Transcriptomics)。意義:1.轉(zhuǎn)錄組譜可以提供特定條件下某些基因表達(dá)的信息,并據(jù)此推斷相應(yīng)未知基因的功能,揭示特定調(diào)節(jié)基因的作用機制.2.通過基于基因表達(dá)譜的分子標(biāo)簽,不只可以辨別細(xì)胞的表型歸屬,還可以用于疾病的診斷.3.轉(zhuǎn)錄組的研究應(yīng)用于臨床的另一個例子是可以將表面上看似相同的病癥分為多個亞型,尤其是對原發(fā)性惡性瘤,通過轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)譜的建立,可以詳細(xì)描繪出患者的生存期以及對藥物的反應(yīng)等。普通轉(zhuǎn)錄組測序主要適用于不同的生長階段或者發(fā)育過程。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序類型:1.根據(jù)RNA種類:可以分為mRNA測序,SmallRNA測序,LncRNA測序、CircRNA測序、全轉(zhuǎn)錄組測序等。2.根據(jù)物種特點:比如真核生物或者原核生物,是否有參考基因組,測序平臺的不同,分為真核有參和無參轉(zhuǎn)錄組測序,原核轉(zhuǎn)錄組測序,全長轉(zhuǎn)錄組測序等。3.根據(jù)相互關(guān)系:分為互作轉(zhuǎn)錄組,比較轉(zhuǎn)錄組等等;此外,基因組甲基化會影響到基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,也屬于轉(zhuǎn)錄調(diào)控測序范疇;還有用于研究轉(zhuǎn)錄因子與DNA的交互作用或組蛋白修飾在基因組上的分布的ChIP-Seq,研究RNA與蛋白互作關(guān)系的RIP-Seq,以及研究RNA甲基化的MeRIP-Seq等。什么是轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序?深圳SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析

轉(zhuǎn)錄組具有時間特異性的特點。深圳SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序結(jié)果的影響因素?RNA的降解嚴(yán)重影響測序的質(zhì)量,RNA降解后,加入poly-A后無法捕獲純化mRNA,因此,隨機引物反轉(zhuǎn)錄無法得到全部的cDNA,導(dǎo)致測序結(jié)果出現(xiàn)明顯的3‘-和5’-偏向。文庫中的poly-A多聚物的存在會對測序信號產(chǎn)生干擾,影響測序結(jié)果的準(zhǔn)確性;同時由于轉(zhuǎn)錄組中轉(zhuǎn)錄本的豐度不一致,實驗前需要對樣本進(jìn)行均一化處理,否則高豐度的表達(dá)基因會掩蓋低豐度表達(dá)基因,導(dǎo)致尋找新基因失敗或者是獲得大量無意義的重復(fù)序列。深圳SmalIRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)定性分析

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