定量蛋白質組學方法學介紹：Label-free：Label-free定量，即非標記的定量蛋白質組學，不需要對比較樣本做特定標記處理，只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質譜響應信號便可得到樣品間蛋白表達量的變化，通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質譜數(shù)據(jù)。Label-free定量不需要標記處理，操作簡單，可以做任意樣本的總蛋白質差異定量，但對實驗操作的穩(wěn)定性、重復性要求較高，準確性也較標記定量差。因此，Label-free技術適合于大樣本量的定量比較，以及對無法用標記定量實現(xiàn)的實驗設計。對人類而言，蛋白質組學的研究終究要服務于人類的健康。TMT／iTRAQ標記定量蛋白質組學價格
非標定量法(Label-free)是通過比較質譜分析次數(shù)或質譜峰強度，分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化，認為肽段在質譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關，因此蛋白質被質譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質的豐度，通過適當?shù)臄?shù)學公式可以將質譜檢測計數(shù)與蛋白質的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質進行定量。按照其原理主要分為兩種，第1種spectrumcounts類的非標記方法，發(fā)展比較早，已經(jīng)形成多種定量算法，但是主要的原理都是以MS2的鑒定結果為定量基礎，各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標記定量的原理是以MS1為基礎，計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分。TMT／iTRAQ標記定量蛋白質組學價格蛋白質組學技術并帶領生物技術取得關鍵性的突破。
蛋白質組學樣品寄樣要求：動物組織的樣本蛋白量相對較高，送樣量的要求也相對比較寬松，一般提供50~100mg的量即可。此外，組織上有血跡、脂肪、結締組織的還需要用PBS和組織剪將其清理干凈。送樣前將樣品用液氮速凍5min，放置在-80℃保存，送樣時需要置于干冰環(huán)境中運輸。動物的懸浮培養(yǎng)細胞也是比較熱門的蛋白組學研究對象，如果想做細胞的蛋白組學，起碼需要1×107個細胞，離心后收集，置于-80攝氏度環(huán)境中。蛋白質組學，指對某一基因組所表達的所有蛋白質及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究，以期望在蛋白質水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網(wǎng)絡。
LabelFree(非標記蛋白質組學技術)：應用：1.需要快速在大量樣本中找到差異表達的蛋白組合。2.需要在較短時間以較低成本得到具有提示意義的蛋白表達數(shù)據(jù)。3.需要檢測的樣品蛋白含量低。4.需要檢測相互作用蛋白。技術特點：1.對質譜儀器設備要求較高，色譜和質譜需要同時有較好的穩(wěn)定性和重復性。2.需要有特殊的定量分析軟件。3.對樣品中蛋白質總量要求較低，實驗周期短，實驗費用低。4.不需要額外并且昂貴的標記試劑，排除了標記過程帶入實驗誤差的風險，同時也不必考慮標記效率的問題。DIA 定量蛋白質組學的循環(huán)時間固定，掃描點數(shù)均勻，定量準確度高。
蛋白質組學我的介紹：蛋白質組學（proteomics）采用高通量和大規(guī)模的研究手段，從整體的角度分析細胞內動態(tài)變化的蛋白質組成成份、表達水平與修飾狀態(tài)，了解蛋白質之間的相互作用與聯(lián)系，揭示蛋白質功能與細胞生命活動規(guī)律，之后達到構建出細胞的“功能圖”的目的。蛋白質作為生命活動的物質承擔者、生理功能的執(zhí)行者和生命現(xiàn)象的直接體現(xiàn)者，研究蛋白質對闡明生命體的變化機制具有重要作用。蛋白質組研究不只可以實現(xiàn)與基因組的關聯(lián)，揭示生命活動的發(fā)生規(guī)律。同樣對人類重大疾病的發(fā)生與發(fā)展的病理機制研究也具有重要作用。生命體的生理、病理過程，藥物和環(huán)境因子的作用都依賴于蛋白質，并引起蛋白質的變化。蛋白質組學研究對提高我國生物醫(yī)學原始創(chuàng)新能力、重大疾病防診治能力和國民健康水平以及新藥研發(fā)能力、生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重大的戰(zhàn)略意義。蛋白質組學技術有電噴霧質譜。北京外泌體蛋白質組學主要技術
DIA 定量蛋白質組學可以采集所有離子及碎片圖譜，重現(xiàn)性好。TMT／iTRAQ標記定量蛋白質組學價格
定量蛋白質組學分析（QuantitativeProteomics）是對一個基因組表達的全部蛋白質或一個復雜混合體系內所有蛋白質進行精確鑒定和定量?？捎糜诤Y選和尋找任何因素引起的樣本之間的差異表達蛋白，結合生物信息學揭示細胞生理病理等功能，同時也可對某些關鍵蛋白進行定性和定量分析。目前定量蛋白質組學技術常見標記（Label）和非標記的（LabelFree）定量策略。定量蛋白質組學技術常見的幾類主要包括：LabelFree定量蛋白組分析、SILAC與免疫共沉淀蛋白互作分析、MRM/PRM定量蛋白組學分析、SILAC/Dimethyl標記定量蛋白組分析、SWATH定量蛋白組學、TMT/iTRAQ/multinotch定量蛋白組學分析。TMT／iTRAQ標記定量蛋白質組學價格