轉錄組測序推薦的測序數(shù)據(jù)量？轉錄組測序所需數(shù)據(jù)量與所研究物種的基因組大小有關，基因組越大，則所需數(shù)據(jù)量越大。按照我們的經驗來說：常規(guī)物種一般建議6G數(shù)據(jù)即可；基因組較大的物種推薦8G以上數(shù)據(jù)，比如：小麥建議10G數(shù)據(jù)起，甘蔗、甘薯建議至少8G數(shù)據(jù)。轉錄組測序必須做生物學重復么？需要幾個重復？生物學重復是生物實驗所必須的，轉錄組測序也不例外，至少3 次生物學重復。準備生物重復樣品時，通過對實驗的預先設計和控制，盡可能將與實驗處理無關的背景條件控制在同一水平，減少批次效應對結果的影響。轉錄組廣義上指在某一生理條件下，細胞內所有轉錄組產物的組合。北京單細胞轉錄組學分析價格

轉錄組學研究的方法：轉錄組學是一門在整體水平上研究細胞中所有基因轉錄及轉錄調控規(guī)律的學科。在早期，由于測序價格昂貴、基因序列數(shù)目有限，轉錄組學研究者只能進行極少數(shù)特定基因的結構功能分析和表達研究。近十幾年，分子生物學技術的快速發(fā)展使高通量分析成為可能，這為真正意義上的轉錄組學的研究奠定了基礎。這些高通量研究方法主要可以分為兩類：一類是基于這類方法包括表達序列標簽技術、基因表達系列分析技術、大規(guī)模平行測序技術、RNA測序技術其中。湖北RNA轉錄組學技術服務轉錄組學可應用于非生物環(huán)境關系研究、植物與微生物、在表型鑒定中的應用、代謝途徑及功能基因組研究。

宏轉錄組分析：從以G為單位的高通量測序數(shù)據(jù)中獲取研究所需的微生物種類、基因、通路等信息是進行宏轉錄組研究必須經歷的一步?，F(xiàn)在網絡上分析組學數(shù)據(jù)的工具五花八門。能否從眾多組學工具中選擇出適合分析宏轉錄組數(shù)據(jù)的軟件，能否搭建一套完整、快速、高效、靈敏、高精確的宏轉錄組分析pipline，直接關乎到后期數(shù)據(jù)分析的進行。這種技術不只具有宏基因組技術的全部優(yōu)點，可以檢測環(huán)境中的活性微生物、活性轉錄本以及活性功能進行研究，還可以比較不同環(huán)境下的差異表達基因和差異功能途徑，揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應機制，探索環(huán)境與微生物之間的互作機理。

單細胞轉錄組關鍵步驟：單細胞的分離和捕獲：溫和分離，稀有細胞。轉錄本的捕獲和擴增：RNA測序需要0.1-1.0ug total RNA，捕獲效率10%（5-20%），DNA測序需要1ng DNA，極限稀釋加移液分離單細胞；顯微操作分選單細胞；流式分選帶有表面Marker的單細胞；激光切割實體組織；微流控技術；磁珠捕獲，主要用于CTC。單細胞轉錄組學基本概念：普通轉錄組的思路也可以應用到單細胞轉錄組。普通轉錄組相當于把一群細胞混合到一起去提取RNA，獲得的是每個細胞中RNA表達量的平均值。單細胞是把每個細胞單獨分出來去提取RNA，然后建庫測序，獲得是是單個細胞的表達值。在每個細胞里面基因的表達具有隨機性，且存在異質性。轉錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。

轉錄組學差異基因數(shù)目多少比較合理？不同的處理，不同的研究目標，差異基因的數(shù)目是不同的，從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數(shù)目是個位數(shù)或者上萬，那么就需要和分析人員溝通一下，查一查是否有問題。轉錄組學差異基因太多，注釋信息太雜亂，怎么挑選目標基因？對不同的差異組合進行維恩圖分析，挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對象；根據(jù)前人的文獻報道，挑選相關差異基因，不要局限在自己研究的物種上。單細胞轉錄組學技術： Anydeplete技術首先通過隨機引物進行一鏈合成，一鏈合成引入核苷酸類似物，用于酶切打斷，二鏈合成同樣引入核苷酸類似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭，接頭一條鏈也帶有核苷酸類似物，用于酶切降解。當形成單鏈文庫后，設計特異性引物與rRNA形成文庫結合，一輪退火延伸，rRNA文庫形成雙鏈結構。circRNA轉錄組學一類具有閉合環(huán)狀結構的非編碼RNA分子。武漢circ RNA轉錄組學

轉錄組即一個活細胞所能轉錄出來的所有RNA的總和，是研究細胞表型和功能的一個重要手段。北京單細胞轉錄組學分析價格

宏轉錄組學也稱為環(huán)境轉錄組學，指從整體水平上研究某一特定環(huán)境、特定時期菌群群體全部基因轉錄情況以及轉錄調控規(guī)律，以揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應機制，探索環(huán)境與微生物之間的相互作用機理。其適用范圍包括人體微生態(tài)、環(huán)境、工業(yè)、農業(yè)等領域。宏轉錄組學以生態(tài)環(huán)境中的全部RNA為研究對象，避開了微生物分離培養(yǎng)困難的問題，能有效的擴展微生物資源的利用空間。應用領域：包括腸道微生物、口腔微生物、糞便微生物、人體組織微生物。北京單細胞轉錄組學分析價格