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深圳全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄學(xué)組分析鑒定

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-30

RNA-Seq,是基于新一代測(cè)序技術(shù)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法:首先提取生物樣品的全部轉(zhuǎn)錄的RNA并進(jìn)行mRNA富集,然后反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行的新一代高通量測(cè)序,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行片段的拼接組裝,從而可得到一個(gè)個(gè)的轉(zhuǎn)錄本,進(jìn)而可以形成對(duì)該生物樣品當(dāng)前發(fā)育狀態(tài)的基因表達(dá)狀況的全局了解。不同階段或部位的生物樣品的RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行比較分析,則可以在轉(zhuǎn)錄層面得到基因表達(dá)水平的變化,針對(duì)關(guān)鍵基因則可以進(jìn)行代謝通路(Pathway)的構(gòu)建。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來(lái)的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)即對(duì)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序和分析。深圳全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄學(xué)組分析鑒定

RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢(shì):相比基因芯片和標(biāo)記的堿基序列的測(cè)序方法,RNA-seq具有一定的優(yōu)越性。與基因芯片相比,RNA-Seq不只可以在更高的分辨率下用來(lái)測(cè)量基因的表達(dá)水平情況,還可以揭示未知的轉(zhuǎn)錄組和拼接亞型,并為選擇性拼接亞型提供定量分析。轉(zhuǎn)錄組學(xué)(Transcriptomics),是一門在真整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科,從RNA水平研究基因的表達(dá)情況。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是通過二代測(cè)序平臺(tái)快速全方面地獲得某一物種特定細(xì)胞或組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有的轉(zhuǎn)錄本及基因序列,可以用來(lái)研究基因表達(dá)量、基因功能、結(jié)構(gòu)、可變剪接和預(yù)測(cè)新的轉(zhuǎn)錄本等等。上海高通量轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以直接測(cè)定每個(gè)轉(zhuǎn)錄本單核苷酸分辨率的準(zhǔn)確度。

circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué):是一類具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子,沒有5′帽子結(jié)構(gòu)和3′poly(A)結(jié)構(gòu),主要位于細(xì)胞質(zhì)或儲(chǔ)存于外泌體中,不受RNA外切酶影響,表達(dá)更穩(wěn)定且不易降解,已被證明普遍存在于多種真核生物體內(nèi)[1]。大多數(shù)circRNA是由外顯子環(huán)化而成,也有部分circRNA是由內(nèi)含子環(huán)化而成的套索結(jié)構(gòu)。同時(shí)由于circRNA含有大量的miRNA應(yīng)答原件(MREs),能與AGO蛋白形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC)的催化關(guān)鍵,然后導(dǎo)致circRNA降解。根據(jù)來(lái)源,circRNA可大致分為四類:全外顯子型的circRNA,內(nèi)含子和外顯子組合的EIcircRNA,內(nèi)含子組成的套索型ciRNA,由病毒RNA基因組、tRNA、rRNA、snRNA等環(huán)化產(chǎn)生的circRNA。

全轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序技術(shù)優(yōu)勢(shì):文庫(kù)優(yōu)化:針對(duì)不同長(zhǎng)度的序列采用兩種文庫(kù)構(gòu)建方法,采用去核糖體的鏈特異性文庫(kù)可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。數(shù)據(jù)全:全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序完成后可獲取4類主要RNA(miRNA,mRNA,lncRNA,circRNA)數(shù)據(jù),可對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)分析及整合分析。關(guān)聯(lián)全:通過對(duì)mRNA/miRNA/lncRNA/circRN序列測(cè)定及后續(xù)分析,深入開展全轉(zhuǎn)錄組調(diào)控網(wǎng)絡(luò)(ceRNA網(wǎng)絡(luò))分析。樣本類型:細(xì)胞,組織,體液、血清、血漿、全血,總RNA等。建議總RNA起始量:>15μg,濃度≥200ng/μL)。狹義上轉(zhuǎn)錄組學(xué)的指所有mRNA的組合。

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組關(guān)鍵步驟:?jiǎn)渭?xì)胞的分離和捕獲:溫和分離,稀有細(xì)胞。轉(zhuǎn)錄本的捕獲和擴(kuò)增:RNA測(cè)序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕獲效率10%(5-20%),DNA測(cè)序需要1ngDNA,極限稀釋加移液分離單細(xì)胞;顯微操作分選單細(xì)胞;流式分選帶有表面Marker的單細(xì)胞;激光切割實(shí)體組織;微流控技術(shù);磁珠捕獲,主要用于CTC。它的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可以結(jié)合流式細(xì)胞熒光分選(FACS,fluorescentactivatedcellsorting)根據(jù)表面Marker分選細(xì)胞。因此特別適合分選細(xì)胞子集用于測(cè)序。它的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可以獲得細(xì)胞形態(tài)全覽圖,提供另外一個(gè)維度的信息,可用于鑒定微孔中是否有損傷的細(xì)胞或雙份細(xì)胞,主要缺點(diǎn)是通量低且每個(gè)細(xì)胞所需的工作量相當(dāng)大。轉(zhuǎn)錄組學(xué)能夠同時(shí)鑒定和定量稀有轉(zhuǎn)錄本和正常轉(zhuǎn)錄本。上海高通量轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法

普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序主要適用于不同的環(huán)境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。深圳全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄學(xué)組分析鑒定

商務(wù)服務(wù)屬于現(xiàn)代服務(wù)業(yè)的范疇,是指為企業(yè)提供服務(wù)的行業(yè)劃分。商務(wù)服務(wù)行業(yè)門類較多,新產(chǎn)業(yè)不斷涌現(xiàn),給產(chǎn)業(yè)的界定和使用造成很多混亂。銷售既可以把我們從書本上得來(lái)的知識(shí)學(xué)以致用,還能在物換星移的時(shí)空里激發(fā)我們對(duì)生命和世界的熱愛。正如銘刻在希臘圣城德爾斐神殿上的出名箴言——“人啊,認(rèn)識(shí)你自己”,在旅途中看到自己的內(nèi)心,生命也因此而豐盛。在文創(chuàng)產(chǎn)品方面,服務(wù)型企業(yè)是蘊(yùn)含著傳統(tǒng)文化基因的禮物是文化服務(wù),是中國(guó)及世界精神文明的象征。所以對(duì)于行業(yè)內(nèi)的無(wú)數(shù)企業(yè)來(lái)說,這不僅是一個(gè)巨大商機(jī),更是一個(gè)發(fā)展前景。嚴(yán)格來(lái)說,無(wú)論是欣賞人文還是享受山水之樂,都離不開良好的有限責(zé)任公司(自然)服務(wù),好的有限責(zé)任公司(自然)服務(wù)總能讓人身心愉悅,更好地融入當(dāng)?shù)厣?,?chuàng)造出旅游記憶。深圳全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄學(xué)組分析鑒定

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