單細胞轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)：單細胞轉(zhuǎn)錄組目前主要有三種方法：SMART擴增技術(shù)、10×genomics技術(shù)及Andeplete技術(shù)。SMART擴增技術(shù)比較關(guān)鍵的技術(shù)，就是設(shè)計了2個特殊的引物。再配合用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進行逆轉(zhuǎn)錄。特殊引物1由中間PolyT序列加上一段通用序列及3’末端兩個簡并堿基構(gòu)成，但在PolyT的3’端倒數(shù)第二個堿基是A、C、G而非T的簡并堿基，而倒數(shù)第1個為簡并堿基，這樣做的好處是讓它正好結(jié)合在mRNA的3’端連到Poly(A)尾巴的這個連接處，而不會結(jié)合到mRNA的別的地方。這樣就保證了逆轉(zhuǎn)錄的起始位置正好是mRNA的3’端的序列終止位置。MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶，這個酶有個特點，就是它在轉(zhuǎn)錄到mRNA的5’端末端的時侯，會在新合成的cDNA的3’末端，多加出幾個C堿基來。轉(zhuǎn)錄學組測序是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復雜性的強大工具。貴陽外泌體轉(zhuǎn)錄組學質(zhì)譜鑒定

什么是轉(zhuǎn)錄組測序？轉(zhuǎn)錄組廣義上指在某一生理條件下，細胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄組產(chǎn)物的組合，包括：mRNA、ncRNA、rRNA等；狹義上指所有mRNA的組合。轉(zhuǎn)錄組測序的研究對象為特定細胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和，主要包括mRNA和ncRNA。轉(zhuǎn)錄組具有時間特異性、組織特異性、空間特異性等特點。普通轉(zhuǎn)錄組測序適用于哪些情況？普通轉(zhuǎn)錄組測序主要適用于兩大類：一是不同的生長階段或者發(fā)育過程；二是不同的環(huán)境、藥物、病原菌等逆境脅迫處理。貴陽全長轉(zhuǎn)錄學組技術(shù)服務轉(zhuǎn)錄組學測序樣品純度要求，OD值應在1.8至2.2之間。

單細胞轉(zhuǎn)錄組關(guān)鍵步驟：單細胞的分離和捕獲：溫和分離，稀有細胞。轉(zhuǎn)錄本的捕獲和擴增：RNA測序需要0.1-1.0ugtotalRNA，捕獲效率10%（5-20%），DNA測序需要1ngDNA，極限稀釋加移液分離單細胞；顯微操作分選單細胞；流式分選帶有表面Marker的單細胞；激光切割實體組織；微流控技術(shù)；磁珠捕獲，主要用于CTC。它的一個優(yōu)點是可以結(jié)合流式細胞熒光分選（FACS,fluorescentactivatedcellsorting）根據(jù)表面Marker分選細胞。因此特別適合分選細胞子集用于測序。它的另一個優(yōu)點是可以獲得細胞形態(tài)全覽圖，提供另外一個維度的信息，可用于鑒定微孔中是否有損傷的細胞或雙份細胞，主要缺點是通量低且每個細胞所需的工作量相當大。

circRNA轉(zhuǎn)錄組學生物學功能：circRNA主要存在于細胞質(zhì)或外泌體中，具有組織特異性、疾病特異性、時序特異性及高穩(wěn)定性等特征。近幾年，大量的研究表明circRNA在生物的生長發(fā)育、脅迫應答、疾病發(fā)生和發(fā)展等方面密切相關(guān)，并預測其在疾病診斷標記物等方面的應用前景，但其生物學功能在很大程度上仍然未知。目前認可度比較高的circRNA生物學功能。circRNA轉(zhuǎn)錄組學成環(huán)機制：circRNA環(huán)化方式分為內(nèi)含子環(huán)化和外顯子環(huán)化。目前主流的成環(huán)機制可歸類為：依賴于剪切體的索尾插接環(huán)化。在mRNA前體上，通過連續(xù)的組裝小核核糖體蛋白從而催化外顯子下游的5′ 供體的位點連接到上游的3′ 受體的位點，索尾插接形成環(huán)化，然后通過剪切形成circRNA。順式作用元件促進circRNA形成。宏轉(zhuǎn)錄組是特定時期、環(huán)境樣本、組織樣本中所有的微生物的RNA（轉(zhuǎn)錄本）的匯合。

RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學的應用：RNA-Seq即對轉(zhuǎn)錄組進行測序和分析。一般來說在研究所會委托公司測序得到數(shù)據(jù)自己進行后續(xù)的生信分析（質(zhì)控，mapping，差異基因表達分析，SNV分析等）。RNA-Seq有著巨大的應用前景。在不同背景下比較mRNA水平同一物種，不同組織：研究基因在不同部分的表達情況。同一物種，同一組織：研究基因在不同處理下，不同條件下的表達變化。同一組織，不同物種：研究基因的進化關(guān)系。時間序列實驗：基因在不同時期的表達情況與發(fā)育的關(guān)系。基因分類：找到細胞特異，疾病相關(guān)，處理相關(guān)的基因表達模式，用于診斷疾病和預測等?；蚓W(wǎng)絡(luò)和通路：基因在細胞活動中的功能，基因間的相互作用。轉(zhuǎn)錄組學可以在單核苷酸水平對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進行檢測。外泌體轉(zhuǎn)錄組學技術(shù)服務

轉(zhuǎn)錄組學是從RNA水平研究基因表達的情況。貴陽外泌體轉(zhuǎn)錄組學質(zhì)譜鑒定

什么叫轉(zhuǎn)錄組學？廣義轉(zhuǎn)錄組是指生命單元(通常是一種細胞)中所有按基因信息單元轉(zhuǎn)錄和加工的RNA分子(包括編碼和非編碼RNA功能單元),或者是一個特定細胞所有轉(zhuǎn)錄本的總和.它的研究對象就是這些RNA與蛋白質(zhì)分子和它們所組成的基因功能網(wǎng)絡(luò)以及它們與細胞功能的關(guān)系.而狹義轉(zhuǎn)錄組是指可直接參與翻譯蛋白質(zhì)的mRNA總和.研究生物細胞中轉(zhuǎn)錄組的發(fā)生和變化規(guī)律的科學就稱為轉(zhuǎn)錄組學(tran—scriptomics)。轉(zhuǎn)錄組學即特定細胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA。貴陽外泌體轉(zhuǎn)錄組學質(zhì)譜鑒定