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濟南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用

來源: 發(fā)布時間:2022-05-08

蛋白質(zhì)組學(xué):質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)組學(xué)的基本原理主要是通過測定被測樣品離子的理化性質(zhì)來進(jìn)行分析,根據(jù)樣品的質(zhì)量譜圖和相關(guān)信息從而得到定性和定量結(jié)果。目前,蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜分析一般是根據(jù)保留時間(retentiontime)、質(zhì)荷比(m/z)、離子強度(intensity)這三個維度對肽蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量,即3D蛋白質(zhì)組學(xué)。4D蛋白質(zhì)組學(xué)在3D蛋白質(zhì)組學(xué)的基礎(chǔ)之上增加了第四維度,離子淌度(mobility),主要根據(jù)離子的形狀和截面對離子進(jìn)行分離,能夠區(qū)分m/z差值非常小的肽段,使低豐度蛋白信號能夠被區(qū)分和識別出來。4D蛋白質(zhì)組學(xué)基于timsTOFPro質(zhì)譜儀,結(jié)合PASEF(ParallelAccumulationSerialFragmentation,同步累積連續(xù)碎裂)與TIMS(TrappedIonMobilitySpectrometry,離子遷移譜),可重復(fù)測量所有檢測離子的碰撞截面(CCS),能更快、更靈敏的進(jìn)行蛋白質(zhì)組定性和定量。定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(label free)定量策略。濟南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用

蛋白質(zhì)組學(xué)基礎(chǔ)研究方面:近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域,如細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等。在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍,涉及到各種重要的生物學(xué)現(xiàn)象,如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、蛋白質(zhì)折疊等等。在未來的發(fā)展中,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究領(lǐng)域?qū)⒏悠毡?。?yīng)用研究方面:蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質(zhì)組技術(shù)也有十分誘人的前景,目前國際上許多大型藥物公司正投入大量的人力和物力進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)方面的應(yīng)用性研究。外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究內(nèi)容蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因組,這是因為一個基因≠一個轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物≠一個蛋白質(zhì)。

定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法學(xué)介紹:Label-free:Label-free定量,即非標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué),不需要對比較樣本做特定標(biāo)記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號便可得到樣品間蛋白表達(dá)量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。Label-free定量不需要標(biāo)記處理,操作簡單,可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,但對實驗操作的穩(wěn)定性、重復(fù)性要求較高,準(zhǔn)確性也較標(biāo)記定量差。因此,Label-free技術(shù)適合于大樣本量的定量比較,以及對無法用標(biāo)記定量實現(xiàn)的實驗設(shè)計。

蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)學(xué)的研究應(yīng)用:蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)是研究細(xì)胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學(xué)。labelfree-非標(biāo)定量法分析技術(shù)方法:非標(biāo)定量法[Labelfree]是近年來重要的質(zhì)譜定量方法,通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化。蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)(LabelFree)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號強度,從而對肽段對應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對定量。蛋白質(zhì)組的研究能為生命活動規(guī)律提供物質(zhì)基礎(chǔ)。

蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:1.蛋白質(zhì)鑒定:能夠應(yīng)用一維電泳和二維電泳并分離相關(guān)的技術(shù),應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及共沉淀等技術(shù)對蛋白質(zhì)停止審定研討。2.修飾:很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要閱歷后修飾如磷酸化,糖基化,酶原刺激等。修飾是蛋白質(zhì)調(diào)理功用的重要方式,因而對蛋白質(zhì)后修飾的研討對說明蛋白質(zhì)的功用具有重要作用。3、蛋白質(zhì)功用:如剖析酶活性和酶底物,細(xì)胞因子的生物剖析/配基-受體分離剖析。能夠應(yīng)用基因敲除和反義技術(shù)剖析基因表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功用。另外對蛋白質(zhì)表達(dá)出來后在細(xì)胞內(nèi)的定位研討也在水平上有助于蛋白質(zhì)功用的理解。近兩年來蛋白質(zhì)組研究技術(shù)已被應(yīng)用到各種生命科學(xué)領(lǐng)域。濟南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用

定量蛋白質(zhì)組學(xué)通過對蛋白質(zhì)的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達(dá)情況。濟南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):等電聚焦:等電聚焦(isoelectricfocusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質(zhì)分離等電點不同的蛋白質(zhì)的電泳技術(shù)。等電聚焦凝膠電泳依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點進(jìn)行分離,等電聚焦中,蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,負(fù)極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場中移動;當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點位置時,其靜電荷數(shù)為零,在電場中不再移動,據(jù)此將蛋白質(zhì)分離。濟南外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用

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