單細胞轉錄組學技術：Anydeplete技術首先通過隨機引物進行一鏈合成，一鏈合成引入核苷酸類似物，用于酶切打斷，二鏈合成同樣引入核苷酸類似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭，接頭一條鏈也帶有核苷酸類似物，用于酶切降解。當形成單鏈文庫后，設計特異性引物與rRNA形成文庫結合，一輪退火延伸，rRNA文庫形成雙鏈結構。Reverseadaptor上帶有特異的酶切位點，當形成雙鏈結構酶切位點被識別，切去接頭，這樣rRNA形成的文庫不帶有完整的接頭，而其他文庫帶有完整接頭，通過PCR擴增富積既能得到想要的信息，包含mRNA及LncRNA信息。同樣Anydeplete技術與10×genomics技術一樣，包含分子標簽，可分析duplication及PCR產(chǎn)生突變位點。轉錄組學是研究特定的細胞、組織或個體在特定時間和狀態(tài)下所轉錄出所有 RNA 的學科。貴州單細胞轉錄組學方法

轉錄組學差異基因數(shù)目多少比較合理？不同的處理，不同的研究目標，差異基因的數(shù)目是不同的，從幾十個到幾千個都有可能。但是如果差異基因數(shù)目是個位數(shù)或者上萬，那么就需要和分析人員溝通一下，查一查是否有問題。轉錄組學差異基因太多，注釋信息太雜亂，怎么挑選目標基因？對不同的差異組合進行維恩圖分析，挑選共有或者特有的差異基因作為后續(xù)的研究對象；根據(jù)前人的文獻報道，挑選相關差異基因，不要局限在自己研究的物種上。單細胞轉錄組學技術： Anydeplete技術首先通過隨機引物進行一鏈合成，一鏈合成引入核苷酸類似物，用于酶切打斷，二鏈合成同樣引入核苷酸類似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭，接頭一條鏈也帶有核苷酸類似物，用于酶切降解。當形成單鏈文庫后，設計特異性引物與rRNA形成文庫結合，一輪退火延伸，rRNA文庫形成雙鏈結構。上海外泌體microRNA轉錄組學定量分析宏轉錄組學以生態(tài)環(huán)境中的全部RNA為研究對象，避開了微生物分離培養(yǎng)困難的問題。

轉錄組學測序比其他研究方法有哪些優(yōu)勢?轉錄組學測序具有以下優(yōu)勢：（1）可以直接測定每個轉錄本片段序列、單核苷酸分辨率的準確度，同時不存在傳統(tǒng)微陣列雜交的熒光模擬信號帶來的交叉反應和背景噪音問題；（2）靈敏度高，可以檢測細胞中少至幾個拷貝的稀有轉錄本；（3）可以對任意物種進行全基因組分析，無需預先設計特異性探針，因此無需了解物種基因信息，能夠直接對任何物種進行轉錄組分析，同時能夠檢測未知基因，發(fā)現(xiàn)新的轉錄本，并準確地識別可變剪切位點及cSNP，UTR區(qū)域。（4）檢測范圍廣，高于6個數(shù)量級的動態(tài)檢測范圍，能夠同時鑒定和定量稀有轉錄本和正常轉錄本。

單細胞轉錄組關鍵步驟：單細胞的分離和捕獲：溫和分離，稀有細胞。轉錄本的捕獲和擴增：RNA測序需要0.1-1.0ug total RNA，捕獲效率10%（5-20%），DNA測序需要1ng DNA，極限稀釋加移液分離單細胞；顯微操作分選單細胞；流式分選帶有表面Marker的單細胞；激光切割實體組織；微流控技術；磁珠捕獲，主要用于CTC。單細胞轉錄組學基本概念：普通轉錄組的思路也可以應用到單細胞轉錄組。普通轉錄組相當于把一群細胞混合到一起去提取RNA，獲得的是每個細胞中RNA表達量的平均值。單細胞是把每個細胞單獨分出來去提取RNA，然后建庫測序，獲得是是單個細胞的表達值。在每個細胞里面基因的表達具有隨機性，且存在異質性。轉錄組具有空間特異性的特點。

全長轉錄組測序的優(yōu)勢：1、全方面鑒定可變剪切；2、發(fā)現(xiàn)更多新基因；3、有效改善基因組注釋；4、鑒定更多的LncRNA；5、準確定位融合基因。研究思路：由于全長轉錄組測序是基于第三代測序技術，因而其成本依然較高，如果全部研究項目均基于全長轉錄組，通常來說很難承擔，因此，全長轉錄組測序一般與普通轉錄組測序相結合。宏轉錄組學是什么？宏轉錄組學也稱為環(huán)境轉錄組學，指從整體水平上研究某一特定環(huán)境、特定時期菌群群體全部基因轉錄情況以及轉錄調控規(guī)律，以揭示微生物在不同環(huán)境壓力下的適應機制，探索環(huán)境與微生物之間的相互作用機理。轉錄學組測序能夠提供更準確的數(shù)字化信號。北京轉錄組學分析價格

宏轉錄組學能有效的擴展微生物資源的利用空間。貴州單細胞轉錄組學方法

circRNA轉錄組學生物學功能：circRNA主要存在于細胞質或外泌體中，具有組織特異性、疾病特異性、時序特異性及高穩(wěn)定性等特征。近幾年，大量的研究表明circRNA在生物的生長發(fā)育、脅迫應答、疾病發(fā)生和發(fā)展等方面密切相關，并預測其在疾病診斷標記物等方面的應用前景，但其生物學功能在很大程度上仍然未知。目前認可度比較高的circRNA生物學功能。circRNA轉錄組學成環(huán)機制：circRNA環(huán)化方式分為內含子環(huán)化和外顯子環(huán)化。目前主流的成環(huán)機制可歸類為：依賴于剪切體的索尾插接環(huán)化。在mRNA前體上，通過連續(xù)的組裝小核核糖體蛋白從而催化外顯子下游的5′ 供體的位點連接到上游的3′ 受體的位點，索尾插接形成環(huán)化，然后通過剪切形成circRNA。順式作用元件促進circRNA形成。貴州單細胞轉錄組學方法