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杭州宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組定量分析

來源: 發(fā)布時間:2022-01-14

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序類型:1.根據(jù)RNA種類:可以分為mRNA測序,SmallRNA測序,LncRNA測序、CircRNA測序、全轉(zhuǎn)錄組測序等。2.根據(jù)物種特點:比如真核生物或者原核生物,是否有參考基因組,測序平臺的不同,分為真核有參和無參轉(zhuǎn)錄組測序,原核轉(zhuǎn)錄組測序,全長轉(zhuǎn)錄組測序等。3.根據(jù)相互關(guān)系:分為互作轉(zhuǎn)錄組,比較轉(zhuǎn)錄組等等;此外,基因組甲基化會影響到基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,也屬于轉(zhuǎn)錄調(diào)控測序范疇;還有用于研究轉(zhuǎn)錄因子與DNA的交互作用或組蛋白修飾在基因組上的分布的ChIP-Seq,研究RNA與蛋白互作關(guān)系的RIP-Seq,以及研究RNA甲基化的MeRIP-Seq等。轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序能夠提供更高的檢測通量。杭州宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組定量分析

circRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)成環(huán)機制:circRNA環(huán)化方式分為內(nèi)含子環(huán)化和外顯子環(huán)化。目前主流的成環(huán)機制可歸類為:依賴于剪切體的索尾插接環(huán)化。在mRNA前體上,通過連續(xù)的組裝小核核糖體蛋白從而催化外顯子下游的5′供體的位點連接到上游的3′受體的位點,索尾插接形成環(huán)化,然后通過剪切形成circRNA。順式作用元件促進circRNA形成。部分circRNA外顯子兩側(cè)的內(nèi)含子中含有反向互補序列,首先在剪切位點上并排形成RNA雙鏈體,再通過可變剪切形成帶內(nèi)含子和不帶內(nèi)含子兩種不同的circRNA?;蛘咄怙@子內(nèi)部以及兩側(cè)的內(nèi)含子可以競爭進行RNA配對,然后通過可變剪切形成不同類型的circRNA。深圳circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)領(lǐng)域RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)即對轉(zhuǎn)錄組進行測序和分析。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域:農(nóng)林領(lǐng)域:生長發(fā)育機制,抗逆脅迫機制,育種,物種保護研究等;畜牧業(yè):生長發(fā)育機制,致病機理研究,肉類及乳制品品質(zhì)研究等;海洋水產(chǎn):生長發(fā)育機制,漁業(yè)資源,漁業(yè)環(huán)境與水產(chǎn)品安全等;微生物:致病機理,耐藥機制,病原體-宿主相互作用研究等;生物醫(yī)藥:生物標(biāo)志物,疾病機理機制,疾病分型,藥物開發(fā),個性化醫(yī)治等;環(huán)境科學(xué):發(fā)酵過程優(yōu)化,生物燃料生產(chǎn),環(huán)境危害風(fēng)險評估研究等;食品科學(xué):食品儲藏及加工條件優(yōu)化,食品組分及品質(zhì)鑒定,功能性食品開發(fā),食品安全監(jiān)檢測等。

全轉(zhuǎn)錄組測序:狹義的轉(zhuǎn)錄組默認(rèn)只包含mRNA,但是廣義的轉(zhuǎn)錄組指的是細(xì)胞或組織中所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的匯合,其中包含mRNA和非編碼RNA(non-codingRNA,ncRNA)。非編碼RNA目前的研究多集中在具有調(diào)控功能的smallRNA(以miRNA為表示),長鏈非編碼RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)和環(huán)狀RNA(circularRNA,circRNA)上,而這幾類ncRNA的調(diào)控對象都和mRNA有關(guān)。因此,全轉(zhuǎn)錄組即包含了ncRNAs和mRNA。全轉(zhuǎn)錄組測序即對以上四種ncRNA進行測序,并分析這四者之間復(fù)雜的相互作用關(guān)系。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序必須做生物學(xué)重復(fù)么?

轉(zhuǎn)錄組學(xué),基因組學(xué),蛋白質(zhì)組學(xué)的區(qū)別:蛋白組學(xué)針對的是全體蛋白,組要以2D-Gel和質(zhì)譜為主,分為top-down和bottom-up分析方法。理念和基因組類似,將蛋白用特定的物料化學(xué)手段分解成小肽段,在通過質(zhì)量反推蛋白序列,之后進行搜索,標(biāo)識已知未知的蛋白序列。轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的是某個時間點的mRNA總和,可以用芯片,也可以用測序。芯片是用已知的基因探針,測序則有可能發(fā)現(xiàn)新的mRNA?;蚪M學(xué)研究的主要是基因組DNA,使用方法目前以二代測序為主,將基因組拆成小片段后再用生物信息學(xué)算法進行迭代組裝。當(dāng)然這只是第1步,隨后還有繁瑣的基因注釋等數(shù)據(jù)分析工作。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以對任意物種進行全基因組分析。杭州宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組定量分析

轉(zhuǎn)錄組學(xué)狹義上指所有mRNA的組合。杭州宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組定量分析

全轉(zhuǎn)錄組測序為什么需要構(gòu)建兩個文庫?全轉(zhuǎn)錄組測序需要構(gòu)建2個測序文庫,一個小RNA文庫和一個去除核糖體RNA的鏈特異性文庫,然后分別上機測序。小RNA長度較短,一般小于50nt,采用測序策略為50SE。其他三類RNA序列一般大于200,通常在1000以上,可達幾萬,通過片段化構(gòu)建150PE測序文庫。然后小RNA文庫可以獲得miRNA序列信息,去核糖體的鏈特異性文庫可以獲得mRNA、lncRNA和circRNA的序列信息。轉(zhuǎn)錄組學(xué)即特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,包括mRNA和非編碼RNA。杭州宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組定量分析

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