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F4/80免疫

來源: 發(fā)布時間:2023-08-27

熒光標(biāo)記二抗的選擇普遍;與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比,成本較低。間接免疫熒光的缺點(diǎn):由于需要具有兩種不同物種反應(yīng)性的兩種抗體,因此物種交叉反應(yīng)性問題增加;與直接免疫熒光相比,時間更長(操作步驟更多)。間接免疫熒光的優(yōu)點(diǎn):通過增加能夠與一抗結(jié)合的二抗數(shù)量進(jìn)行信號放大;與直接免疫熒光相比,通過信號放大提高檢測靈敏度;熒光標(biāo)記二抗的選擇普遍;與使用熒光素結(jié)合一抗的檢測相比,成本較低。間接免疫熒光的缺點(diǎn):由于需要具有兩種不同物種反應(yīng)性的兩種抗體,因此物種交叉反應(yīng)性問題增加;與直接免疫熒光相比,時間更長(操作步驟更多)。熒光抗體法是利用熒光標(biāo)記的抗體來追蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法。F4/80免疫

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熒光的產(chǎn)生:一此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲存能量(如光能、化學(xué)能等)而進(jìn)入激發(fā)態(tài),當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時,過剩的能量可以電磁輻射的形式放射(即發(fā)光)。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是:可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光;而一旦停止供能,發(fā)光(熒光)現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失。可以引起發(fā)熒光的能量種類很多,由光激發(fā)所引起的熒光稱為致熒光。由化學(xué)應(yīng)所引起的稱為化學(xué)熒光,由X線或陰極射線引起的分別稱為X線熒光或陰極射線熒光。熒光免疫技術(shù)一般應(yīng)用致熒光物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。IBA-1免疫熒光檢查熒光抗體技術(shù)可以用于檢測和定位細(xì)胞或組織中的特定抗原物質(zhì)。

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免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng):為了保證熒光染色的正確性,初次試驗(yàn)時需設(shè)置下述對照,以排除某些非特異性熒光染色的干擾。①標(biāo)本自發(fā)熒光對照:標(biāo)本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS。②特異性對照(抑制試驗(yàn)):標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體,再加熒光標(biāo)記的特異性抗體。③陽性對照:已知的陽性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體。如果標(biāo)本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光,陽性對照和待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光,則為特異性陽性染色。一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3min,就有熒光減弱現(xiàn)象,經(jīng)熒光染色的標(biāo)本較好在當(dāng)天觀察,隨著時間的延長,熒光強(qiáng)度會逐漸下降。

細(xì)胞免疫熒光步驟對大家來說一定是很陌生的,他是一種抗原抗體反應(yīng),好像對我們來說他顯得很遙遠(yuǎn)的樣子,因?yàn)槲覀儾⒉涣私馑茏鍪裁?,通過這種技術(shù)可以讓我們對抗原或抗體的性質(zhì)、定位一次來分析出更多的數(shù)據(jù)。細(xì)胞免疫熒光,這對很多人來說都是一次聽說這個東西,也不知道他對我們會有什么好處與壞處,科學(xué)研究就是這樣子的,普通老百姓是不會明白其中的道理的,但是這些研究也是確實(shí)的在我們的生活中取得了成果,能夠讓大家過的更加舒適。免疫熒光技術(shù)通過熒光信號的觀察來確定抗原或抗體的分布和定位。

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免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng):對熒光標(biāo)記的抗體的稀釋,要保證抗體的蛋白有一定的濃度,一般稀釋度不應(yīng)超過1:20,抗體濃度過低,會導(dǎo)致產(chǎn)生的熒光過弱,影響結(jié)果的觀察。染色的溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化,染色時間可以從10min到數(shù)小時,一般30min已足夠。染色溫度多采用室溫(25℃左右),高于37℃可加強(qiáng)染色效果,但對不耐熱的抗原(如流行性乙型腦炎病毒)可采用0-2℃的低溫,延長染色時間。低溫染色過夜較37℃30min效果好的多。熒光抗原法是利用已知的熒光標(biāo)記物來追蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法。F4/80免疫

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。F4/80免疫

細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):根據(jù)所檢測抗原所在位置來確認(rèn)是否需要加入 Triton 進(jìn)行通透。若所檢測抗原表位位于膜蛋白的白外段,則不需要通透;一般 5% BSA 封閉即可達(dá)到效果;從加熒光二抗起,后面所有操作步驟盡量避光??s短在熒光顯微鏡下的觀察時間,1~2 h 為宜。染色后盡快熒光顯微鏡下觀察,若不能可放入 4 ℃ 冰箱避光保存一周。無/弱染色:烤片溫度過高,推薦 56~60 ℃ 1~2 h;一抗是否適用固定液和石蠟切片,使用濃度是否過低,孵育是否時間過短等。F4/80免疫

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