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南京anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠原理

來源: 發(fā)布時間:2024-06-06

Co-IP的實驗步驟:
1. 細(xì)胞裂解:首先,細(xì)胞或組織被裂解,釋放其中的蛋白質(zhì)。
2. 抗體結(jié)合:然后,將特異性抗體(針對已知蛋白質(zhì)之一的抗體)加入到裂解物中。這些抗體會特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白(誘餌蛋白)上。
3. 免疫復(fù)合物形成:抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后,形成免疫復(fù)合物。
4. 沉淀:接著,使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子(如瓊脂糖或磁性珠子)來捕獲免疫復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合,從而拉下抗體以及與之結(jié)合的目標(biāo)蛋白和任何相關(guān)的相互作用蛋白。
5. 洗滌:捕獲的免疫復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。
6. 洗脫和分析:免疫復(fù)合物被洗脫并進(jìn)行進(jìn)一步的分析,如Western blot(WB)或質(zhì)譜分析,以鑒定相互作用的蛋白質(zhì)。
免疫沉淀技術(shù)ChIP的實驗設(shè)計。南京anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠原理

免疫沉淀純化所得抗原純度低一般有多種原因:
1. 非特異性蛋白污染
如果洗脫所得抗原純度較低,則有幾種方法可以進(jìn)行優(yōu)化。在結(jié)合或洗滌緩沖液中加入去污劑或其他可以降低非特異性結(jié)合的組分。使用普通微珠預(yù)純化樣本還可以降低非目標(biāo)分子的共純化。此外,還可以使用無關(guān)蛋白 (如BSA) 封閉微珠 。
2. 抗體污染
使用蛋白A、G或A/G的經(jīng)典免疫沉淀實驗中會出現(xiàn)抗體與抗原共洗脫的情況。如果共洗脫會影響下游分析,則需要使用抗體通過共價連接固定至微珠的方法進(jìn)行實驗,如Pierce 直接 IP 或交聯(lián) IP 的形式。
北京Protein AG免疫沉淀磁珠多少錢免疫沉淀ChIP抗體的選擇?

免疫沉淀(ChIP)實驗中抗體的選擇非常關(guān)鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。
1. 特異性:抗體應(yīng)當(dāng)對目標(biāo)蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合,導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
2. 親和力:抗體對目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。
3. 抗體類型:單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。
4. 應(yīng)用驗證:選擇已經(jīng)過免疫沉淀(ChIP)或相關(guān)應(yīng)用(如Western blot, IHC)驗證的抗體,這增加了實驗成功的可能性。
5. 供應(yīng)商信息:選擇信譽(yù)良好的抗體供應(yīng)商,并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評價,以幫助做出決策。

免疫沉淀實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力,但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡而言之,瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng),而磁珠在得率,可重復(fù)性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
免疫沉淀樣本的制備。

染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatinimmunoprecipitation,ChIP)技術(shù)是目前公認(rèn)的研究此相互作用的選擇,是真核生物基因表達(dá)機(jī)制研究中不可或缺的技術(shù)之一。
它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下,固定蛋白質(zhì)-DNA(染色質(zhì))復(fù)合物,并將其切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過免疫學(xué)方法(抗體親和)沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA,通過對目的片段的純化與后期檢測,從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。
這項技術(shù)通過蛋白質(zhì)與DNA互作來分析目標(biāo)基因活性以及已知蛋白質(zhì)的靶基因,被廣泛應(yīng)用于體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子與靶基因啟動子上特異核苷酸序列結(jié)合方面的研究。該技術(shù)常與DNA芯片和分子克隆技術(shù)相結(jié)合。
免疫沉淀技術(shù)Co-IP的實驗設(shè)計。北京anti Flag免疫沉淀磁珠哪個公司好用

免疫沉淀技術(shù)RIP的實驗方法。南京anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠原理

免疫沉淀(Co-IP)實驗中抗體的選擇非常關(guān)鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。
1. 特異性:抗體應(yīng)當(dāng)對目標(biāo)蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合,導(dǎo)致假陽性結(jié)果。
2. 親和力:抗體對目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。
3. 抗體類型:單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于IP實驗。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。
4. 應(yīng)用驗證:選擇已經(jīng)過免疫沉淀(Co-IP)或相關(guān)應(yīng)用(如Western blot, IHC)驗證的抗體,這增加了實驗成功的可能性。
5. 供應(yīng)商信息:選擇信譽(yù)良好的抗體供應(yīng)商,并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評價,以幫助做出決策。
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世途科生物簡介:

上海世途科生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的,為全球用戶提供生物試劑的生命科學(xué)企業(yè)。世途科生物(CYTOCH)匯集了一支由海內(nèi)外KOL組成的研發(fā)團(tuán)隊,他們在生物和化學(xué)領(lǐng)域擁有相當(dāng)豐富的研發(fā)經(jīng)驗,通過將化學(xué)與生物技術(shù)相結(jié)合,致力于現(xiàn)有技術(shù)難點突破、新技術(shù)研究,為相關(guān)科學(xué)研究者提供思路和解決辦法。

憑借著強(qiáng)大的研發(fā)實力和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量管理,通過產(chǎn)學(xué)研合作,加快客戶科研成果的轉(zhuǎn)化,不斷推動行業(yè)的發(fā)展。

標(biāo)簽: 免疫沉淀 支原體
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