細胞培養(yǎng)中，需要去除支原體的污染：支原體污染是細胞培養(yǎng)中 普遍的問題之一，細胞庫中或正在使用的細胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng) – 阻礙細胞生長和增殖
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導和形態(tài)
04/ 損害膜和細胞器
05/ 導致突變和染色體變化
06/ 時間、金錢和有價值的細胞丟失，耽誤研究時間
07/ 實驗結(jié)果的不可靠性，實驗結(jié)果的重復性 降低
08/ 生物安全問題
支原體檢測的樣本用什么合適？上海支原體檢測如何取樣
細胞培養(yǎng)中支原體污染會對實驗結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響，具體包括：
1. 細胞生長受影響：支原體污染可能導致細胞生長速度減慢，甚至停滯。
2. 細胞形態(tài)改變：支原體感*的細胞可能會出現(xiàn)形態(tài)的改變，如細胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細胞功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝、增殖、分化等生理功能。
4. 細胞產(chǎn)物改變：支原體感*可能影響細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細胞因子等生物活性物質(zhì)的表達和分泌。
5. 實驗結(jié)果不準確：支原體污染會干擾實驗結(jié)果的準確性，導致實驗數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實驗重復性差：支原體污染的細胞培養(yǎng)批次間差異大，影響實驗的重復性。
7. 影響后續(xù)實驗：支原體污染的細胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實驗，如轉(zhuǎn)染、基因編輯等，可能會影響實驗效果。
8. 影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量：支原體污染會影響細胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量，如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費額外的時間和成本進行檢測、處理和重復實驗。
上海支原體檢測如何取樣支原體預防主要是什么成分？
細胞被支原體污染后可能會出現(xiàn)以下幾種情況：
1. 生長速度變慢：支原體污染的細胞生長速度可能會減慢，甚至停止生長。
2. 形態(tài)改變：部分細胞可能會變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細胞在支原體污染后，形態(tài)變化可能不明顯，但有些細胞可能會出現(xiàn)體積增大、細胞碎片增多等現(xiàn)象。
3. 培養(yǎng)液pH變化：支原體污染的細胞可能導致培養(yǎng)液pH值變化明顯，更換培養(yǎng)液后幾小時內(nèi)變酸（顏色變黃）。
4. 細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積：在某些情況下，細胞與細胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積，影響細胞的正常生長和傳代。
5. 細胞功能受損：支原體污染可能會影響細胞的代謝和功能，如影響細胞蛋白質(zhì)、DNA、RNA的合成。
6. 染色體畸變：支原體污染可能會導致細胞染色體斷裂、數(shù)目減少，出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細胞產(chǎn)量受影響：對于巨噬細胞等免疫細胞的培養(yǎng)，支原體污染可能會抑制干擾素的合成和降低其活性。
8. 細胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：污染的細胞可能成為實驗室的污染源，影響工作區(qū)域、培養(yǎng)箱和液氮罐等。
9. 實驗結(jié)果的不確定性：使用被支原體污染的細胞進行實驗可能會得到不準確的結(jié)果，影響科研的可靠性。
一步法快速支原體檢測的原理主要基于等溫擴增技術，這是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。以下是具體的步驟和原理：
1. 等溫擴增技術：一步法快速支原體檢測試劑盒利用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification，環(huán)介導等溫擴增）技術或類似的等溫擴增技術。這些技術允許在恒定溫度下進行DNA的快速擴增，通常在60-65°C之間。
2. 特異性引物：該方法使用設計好的特異性引物，這些引物靶向支原體DNA的保守區(qū)域。引物的設計確保了擴增過程的特異性，從而減少非目標序列的擴增。
3. 快速擴增：在適宜的條件下，等溫擴增技術可以在15至60分鐘內(nèi)實現(xiàn)高達10^9至10^10倍的核酸擴增，從而快速檢測出支原體的存在。
4. 顏色變化指示：一步法試劑盒中通常包含有顏色指示劑，當支原體DNA被擴增時，反應液的顏色會發(fā)生變化，從而可以通過肉眼直接觀察到檢測結(jié)果。例如，從藍紫色變?yōu)樘焖{色，表示樣本中存在支原體。
5. 操作簡便：一步法支原體檢測不需要復雜的設備，通常只需要水浴鍋或PCR儀即可完成操作，使得檢測過程更加簡便快捷。
支原體預防的實驗步驟？
支原體污染的來源主要包括以下幾個方面：
1. 實驗室環(huán)境中可能存在支原體污染源，如空氣中的塵埃、其他培養(yǎng)物中的支原體污染等。
2. 實驗操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體，造成細胞培養(yǎng)的污染。
3. 培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)材料如果受到支原體污染，也會導致細胞培養(yǎng)物受到污染。
4. 細胞交叉污染，即使用已受污染的細胞株進行培養(yǎng)時，可能會污染其他細胞。
5. 實驗器材帶來的污染，如未徹底消毒滅菌的實驗器材。
6. 人體是某些支原體的正常菌群，因此操作人員的疏失也可能成為污染源。
7. 細胞庫管理不善，造成實驗室間的相互污染。
8. 細胞培養(yǎng)過程中的細菌、酵母或霉菌污染在光學顯微鏡下可見，但支原體污染在光學顯微鏡下通常不可見，必須通過特定的檢測方法進行檢測
細胞培養(yǎng)支原體污染怎么去除？上海支原體檢測方法等溫擴增
支原體及污染方式有哪些？上海支原體檢測如何取樣
細胞培養(yǎng)中如果污染了支原體，會有以下幾種影響：
1. 細胞生長受影響：支原體污染會導致細胞生長速度減慢，甚至停止生長。細胞可能會變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。
2. 細胞形態(tài)變化：雖然某些細胞在支原體污染后形態(tài)變化不明顯，但有些細胞會出現(xiàn)體積增大，細胞碎片增多，培養(yǎng)瓶中細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積等現(xiàn)象。
3. 代謝和功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝和功能，例如培養(yǎng)液中的精氨酸被大量消耗，引起細胞蛋白質(zhì)、DNA、rRNA、mRNA的合成障礙。支原體活動還可能引起培養(yǎng)液成分和pH值的變化。
4. 實驗結(jié)果受影響：使用被支原體污染的細胞進行實驗會嚴重影響實驗結(jié)果，因為支原體會抑制細胞生長，導致染色體畸變，細胞膜抗原性改變，細胞復蘇后存活率降低等。
5. 細胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：一株污染的細胞可能成為實驗室的污染源，對工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進而污染其他細胞，導致其他細胞繼發(fā)性污染。
6. 科研結(jié)果的重復性問題：由于支原體污染，某些實驗結(jié)果可能能在支原體陽性的細胞中得到，導致科研結(jié)果的重復性受到影響
上海支原體檢測如何取樣