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杭州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)如何取樣

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-08-13

支原體是細(xì)胞外生存的 小微生物,是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物,大小一般在0.2~0.5um之間,呈高度多形性,有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。
1、支原體存在于我們周圍,他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過(guò)一般的濾膜,所以不要寄希望于過(guò)濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率高,據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。同時(shí)又非常隱秘,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測(cè)試劑盒。支原體因?yàn)閭€(gè)頭小,能穿過(guò)0.22微米濾器,并且在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)會(huì)潛在的擴(kuò)散。支原體污染使得用被污染的細(xì)胞樣本做的實(shí)驗(yàn)完全失去意義和價(jià)值。
支原體去除的原理是什么?杭州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)如何取樣

支原體的預(yù)防可通過(guò)以下方式:
1. 控制污染源:通過(guò)定期檢測(cè)和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無(wú)支原體存在,從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2. 改善無(wú)菌操作技術(shù):通過(guò)提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí),避免在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中引入支原體污染。
3. 使用無(wú)菌設(shè)備和耗材:使用無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材,如無(wú)菌培養(yǎng)基、血清等,減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
4. 定期消毒和清潔:對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔,包括工作臺(tái)、培養(yǎng)箱等,以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑:使用專門針對(duì)支原體的預(yù)防性試劑,如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺(tái)噴霧、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤預(yù)防等,以預(yù)防支原體污染。
6. 提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí):通過(guò)科普教育和培訓(xùn),提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)和預(yù)防意識(shí)。
7. 建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程:制定并執(zhí)行嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程,包括樣本處理、廢物處理、設(shè)備維護(hù)等,以降低支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體去除試劑貨期對(duì)于同一個(gè)樣品,為什么一步法恒溫試劑盒檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,而PCR檢測(cè)為陰性呢?

細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測(cè)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果可能由以下原因引起:
1. 擴(kuò)增產(chǎn)物污染:PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理,極微量的污染就可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。
2. 引物設(shè)計(jì)不當(dāng):引物設(shè)計(jì)不夠特異性,可能會(huì)與非目標(biāo)序列發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
3. 試劑質(zhì)量問(wèn)題:使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質(zhì)量不佳,可能引起非特異性擴(kuò)增或假陽(yáng)性結(jié)果。
4. 操作技術(shù)問(wèn)題:實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范,如混合樣本、標(biāo)簽錯(cuò)誤或樣本標(biāo)識(shí)不清等,可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。
5. PCR反應(yīng)條件設(shè)置不當(dāng):不恰當(dāng)?shù)腜CR反應(yīng)條件,如溫度和時(shí)間選擇不當(dāng),可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。
6. DNA污染:PCR環(huán)境中的DNA污染會(huì)干擾結(jié)果,導(dǎo)致假陽(yáng)性

細(xì)胞庫(kù)支原體檢測(cè)的必要性主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:
1. 確保細(xì)胞庫(kù)的質(zhì)量與安全性:細(xì)胞庫(kù)的建立需要為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞。支原體檢測(cè)是確保細(xì)胞庫(kù)中細(xì)胞質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。
2. 符合監(jiān)管要求:支原體檢測(cè)是生物制品安全性監(jiān)管的一部分,全球范圍內(nèi)的藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中都有支原體檢測(cè)的相關(guān)說(shuō)明。
3. 避免對(duì)生物制品的影響:支原體污染可能會(huì)影響生物制品的安全性和有效性,因此需要通過(guò)檢測(cè)來(lái)避免這種風(fēng)險(xiǎn)。
4. 維護(hù)細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性:支原體是真核細(xì)胞和干細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)的問(wèn)題之一,它們可以改變細(xì)胞的代謝、減緩增殖速度,甚至引起染色體畸變。
5. 預(yù)防交叉污染:由于支原體可以通過(guò)氣溶膠和微粒污染實(shí)驗(yàn)室其他區(qū)域,支原體檢測(cè)有助于預(yù)防交叉污染的發(fā)生。
6. 保障數(shù)據(jù)的可靠性:支原體污染可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,因此定期進(jìn)行支原體檢測(cè)有助于保障研究數(shù)據(jù)的可靠性。
7. 常規(guī)監(jiān)測(cè)的重要性:支原體應(yīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目,以確保細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量和安全。
8. 遵守藥典規(guī)定:根據(jù)中國(guó)藥典的規(guī)定,每8~12代細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)進(jìn)行支原體檢查,以符合規(guī)定。
一步法支原體檢測(cè)試劑盒怎么防污染?

支原體去除的原理通常涉及以下幾個(gè)方面:
1. 抗*素作用:使用特定的抗*素制劑來(lái)抑制支原體的生長(zhǎng)和繁殖。例如,含有喹諾酮類、四環(huán)素衍生物類和大環(huán)內(nèi)酯類抗*素的混合制劑,這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。
2. 破壞細(xì)胞膜:支原體去除劑中的抑菌肽(AMPs)成分通過(guò)破壞支原體細(xì)胞膜的完整性,導(dǎo)致支原體細(xì)胞死亡。
3. 抑制DNA復(fù)制:支原體去除劑通過(guò)抑制支原體DNA回旋酶活性,有效抑制支原體DNA的復(fù)制,從遺傳物質(zhì)著手徹底殺滅支原體。
4. 協(xié)同作用:某些支原體去除劑利用抑菌肽(AMPs)和穿膜肽(CPPs)的協(xié)同作用來(lái)除去支原體,穿膜肽能夠幫助抑菌肽更有效地穿透細(xì)胞膜,增強(qiáng)其殺滅支原體的能力。

支原體檢測(cè)的應(yīng)用場(chǎng)景?深圳細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨

支原體檢測(cè)有哪些方法?杭州細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)如何取樣

目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動(dòng)物、昆蟲和植物中,其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實(shí)驗(yàn)室中的傳播來(lái)源多種多樣,主要來(lái)源包括實(shí)驗(yàn)室人員、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由豬來(lái)源的胰蛋白酶溶液。此外,來(lái)自其他實(shí)驗(yàn)室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑;非無(wú)菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液;實(shí)驗(yàn)室人員;培養(yǎng)箱;液氮;空氣顆粒和氣溶膠;抗*素的過(guò)度使用;細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封;以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。
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標(biāo)簽: 免疫沉淀 支原體
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