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南京Protein AG免疫沉淀實(shí)驗(yàn)原理

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2025-03-27

免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)是一種廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)和生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中的技術(shù),主要用于從復(fù)雜混合物中分離和富集特定的目標(biāo)蛋白或多肽。該技術(shù)基于抗原與抗體之間的特異性結(jié)合,通過(guò)抗體與目標(biāo)蛋白的結(jié)合,再利用固相載體(如瓊脂糖珠或磁珠)將抗原-抗體復(fù)合物從溶液中分離出來(lái)。免疫沉淀技術(shù)不僅可用于蛋白質(zhì)的純化,還可用于研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)翻譯后修飾以及蛋白質(zhì)功能分析等領(lǐng)域。免疫沉淀的基本步驟包括樣品制備、抗體孵育、復(fù)合物捕獲和洗脫。免疫沉淀操作中,合適抗體的選擇是決定能否成功捕獲目標(biāo)抗原的重要前提。南京Protein AG免疫沉淀實(shí)驗(yàn)原理

之后加入 Protein A/G 珠子,再次孵育,使抗原 - 抗體復(fù)合物與珠子結(jié)合。通過(guò)離心或磁力分離,將結(jié)合有蛋白質(zhì)復(fù)合物的珠子收集起來(lái),隨后進(jìn)行多次洗滌,去除未結(jié)合的雜質(zhì)。洗滌過(guò)程中,洗滌液的成分和洗滌次數(shù)同樣影響著實(shí)驗(yàn)結(jié)果的純度和特異性。,使用洗脫液將蛋白質(zhì)復(fù)合物從珠子上洗脫下來(lái),用于后續(xù)的分析。Co-IP 免疫沉淀在生命科學(xué)研究的多個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在信號(hào)傳導(dǎo)通路研究中,通過(guò) Co-IP 免疫沉淀可以鑒定出參與同一信號(hào)通路的蛋白質(zhì),明確它們之間的上下游關(guān)系,從而構(gòu)建完整的信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。上海anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠的選擇利用 Protein A/G 免疫沉淀,可深入探究蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的功能與相互作用。

例如在研究腫瘤細(xì)胞的增殖信號(hào)通路時(shí),科研人員可以以某個(gè)關(guān)鍵的信號(hào)蛋白為誘餌,利用 Co-IP 免疫沉淀找出與之相互作用的其他蛋白,揭示腫瘤細(xì)胞異常增殖的分子機(jī)制。在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域,Co-IP 免疫沉淀可用于研究神經(jīng)元中蛋白質(zhì)的相互作用,了解神經(jīng)遞質(zhì)釋放、突觸可塑性等過(guò)程的分子基礎(chǔ)。雖然 Co-IP 免疫沉淀技術(shù)有著諸多優(yōu)勢(shì),如能夠在接近生理?xiàng)l件下研究蛋白質(zhì)相互作用,結(jié)果更具生理相關(guān)性;可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)蛋白質(zhì)之間的相互作用,有助于發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)復(fù)合物。

我們向裂解液中加入針對(duì)某個(gè)已知蛋白(誘餌蛋白)的特異性抗體,抗體與誘餌蛋白結(jié)合形成抗原 - 抗體復(fù)合物。如同 IP 免疫沉淀一樣,借助 Protein A/G 磁珠或瓊脂糖珠等固相載體,將抗原 - 抗體復(fù)合物從復(fù)雜的裂解液中分離出來(lái)。此時(shí),與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白質(zhì)(獵物蛋白)也會(huì)隨著誘餌蛋白一起被沉淀下來(lái),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)復(fù)合物的富集和分析,幫助我們了解細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系。實(shí)驗(yàn)流程上,首先同樣是細(xì)胞或組織的裂解。免疫共沉淀(Co-IP)是研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,揭示分子網(wǎng)絡(luò)。

免疫沉淀技術(shù)自誕生以來(lái),便在生命科學(xué)研究領(lǐng)域扮演著舉足輕重的角色。早期的免疫沉淀技術(shù)較為簡(jiǎn)單,主要依賴于抗原抗體的基本結(jié)合原理。隨著研究的深入,科研人員不斷優(yōu)化,使得這一技術(shù)逐漸成熟。如今,它已成為研究生物分子相互作用的重要手段。免疫沉淀的原理基于抗原與抗體的特異性識(shí)別。在復(fù)雜的生物樣本中,抗體如同 “精確制導(dǎo)武器”,能靶向結(jié)合目標(biāo)抗原,形成穩(wěn)定的抗原 - 抗體復(fù)合物。再利用固相載體的特性,將復(fù)合物從樣本中分離出來(lái),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的富集與分析。免疫沉淀搭配其他技術(shù),如 western blot,可對(duì)目標(biāo)蛋白定性定量,豐富研究維度。杭州免疫沉淀磁珠多少錢(qián)

通過(guò)免疫共沉淀(Co-IP),可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)。南京Protein AG免疫沉淀實(shí)驗(yàn)原理

免疫沉淀技術(shù)的成功關(guān)鍵在于抗體的選擇和質(zhì)量。高特異性和高親和力的抗體能夠顯著提高目標(biāo)蛋白的富集效率,并減少非特異性結(jié)合的干擾。此外,實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化(如緩沖液成分、孵育時(shí)間和溫度)也對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有重要影響。為了確保實(shí)驗(yàn)的可靠性,通常會(huì)設(shè)置陰性對(duì)照(如使用非特異性抗體)以排除非特異性結(jié)合的干擾。免疫沉淀技術(shù)的應(yīng)用非常。例如,在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究中,免疫沉淀可以與質(zhì)譜聯(lián)用(Co-IP/MS)來(lái)鑒定與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白網(wǎng)絡(luò)。南京Protein AG免疫沉淀實(shí)驗(yàn)原理

標(biāo)簽: 免疫沉淀 支原體
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