Guide-seq原理圖，Discover-seq細(xì)胞內(nèi)的脫靶切割一般無法直接捕獲，除了Guide-seq這種連接dsODN來間接記錄脫靶位點的方法外，研究者們還想出一種蛋白介導(dǎo)的方法Discover-seq。由于DNA雙鏈斷裂后細(xì)胞會啟動DNA修復(fù)機制，大量蛋白參與到斷裂處的修復(fù)，所以研究者就對相關(guān)蛋白進行篩選，找到其中MRE11結(jié)合DNA的位點與DNA雙鏈斷裂的相關(guān)性比較好。DISCOVER-seq便是通過MRE11的CHIP-seq（染色質(zhì)免疫共沉淀）來反映CRISPR的脫靶位點。。。。脫靶檢測在揭示CRISPR/Cas9系統(tǒng)的脫靶機制以及進一步提高系統(tǒng)靶向性的研究中具有重要作用。江蘇基因療法脫靶檢測評估標(biāo)準(zhǔn)

    基因編輯脫靶檢測方法：ChIP-seq：利用缺乏DNA切割活性的dCas9結(jié)合DNA的特性，進行全基因組范圍的結(jié)合情況檢測，以評估潛在的脫靶位點。IDLVcapture：基于非同源末端連接（NHEJ）的DNA修復(fù)過程，通過轉(zhuǎn)染篩選基因的IDLV進行篩選，以確認(rèn)脫靶位點。GUIDE-seq：利用雙鏈DNA斷裂（DSB）位點的非同源末端連接過程中可以連入雙鏈DNA的特性，通過引入短雙鏈寡核苷酸來標(biāo)記CRISPR/Cas9切割的DSB，進而確定脫靶突變的位置。LAM-HTGTS：基于CRISPR/Cas9等造成的DSB可能導(dǎo)致染色質(zhì)DNA的易位連接，通過檢查這些易位連接位點來識別潛在的脫靶位點。BLESS/BLISS/End-seq/DSBCapture等：這些方法通過直接在DSB位點連入接頭，捕獲DSB位點，結(jié)合高通量測序技術(shù)進行脫靶位點檢測。DISCOVER-seq：利用DNA修復(fù)因子（如MRE11）結(jié)合染色質(zhì)免疫共沉淀和高通量測序的方法，捕獲CRISPR/Cas9造成的DSB位點，進而鑒定潛在的脫靶位點。 上海高精度脫靶檢測報告檢測脫靶效應(yīng)比較好的方法:CIRCLE-seq。

    脫靶檢測是指通過檢測基因編輯工具（如CRISPR/Cas9）是否在非目標(biāo)位點發(fā)生切割或改變DNA序列，以評估其安全性和有效性。這種檢測方法可以幫助研究人員避免潛在的副作用和風(fēng)險，并確?；蚓庉嫻ぞ咴谡_的位置發(fā)揮作用。脫靶檢測可以通過多種方法進行，包括高通量測序、PCR擴增、生物信息學(xué)分析和表型分析等。其中，高通量測序是一種常用的方法，它可以通過比較編輯前后的DNA序列來確定是否存在非目標(biāo)位點的切割或改變。PCR擴增則可以通過檢測編輯后的DNA序列來確定是否存在非目標(biāo)位點的切割。生物信息學(xué)分析可以通過比對編輯前后的DNA序列和已知的基因組信息來確定是否存在非目標(biāo)位點的切割。表型分析則可以通過觀察編輯后的細(xì)胞或生物體的表型變化來確定是否存在非目標(biāo)位點的切割。脫靶檢測對于基因編輯技術(shù)的安全性和有效性至關(guān)重要。如果基因編輯工具在非目標(biāo)位點發(fā)生切割或改變DNA序列，可能會導(dǎo)致不可預(yù)測的后果，如基因突變。因此，脫靶檢測可以幫助研究人員評估基因編輯技術(shù)的風(fēng)險，并采取相應(yīng)的措施來降低風(fēng)險。

隨著基因編輯技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，脫靶檢測技術(shù)也將不斷進步和創(chuàng)新。未來的脫靶檢測技術(shù)將更加靈敏、特異和高效，能夠覆蓋更廣的基因組和基因組編輯工具。此外，隨著人工智能和機器學(xué)習(xí)技術(shù)的發(fā)展，基于大數(shù)據(jù)和算法的脫靶預(yù)測和驗證方法也將成為可能。在生物醫(yī)學(xué)研究中，脫靶檢測技術(shù)的改進和創(chuàng)新將有助于提高基因編輯技術(shù)的安全性和有效性，推動其在疾病干預(yù)和基因療法中的應(yīng)用。同時，脫靶檢測技術(shù)的發(fā)展也將促進對基因功能和基因組復(fù)雜性的深入理解，為生物醫(yī)學(xué)研究提供新的思路和方法。根據(jù)選擇的sgRNA，通過生物信息學(xué)方法，對sgRNA進行脫靶分析。

 體外檢測技術(shù)體外檢測方法通過將編輯工具與基因組DNA在體外孵育來預(yù)測潛在脫靶位點。3.1.1 CIRCLE-seqCIRCLE-seq是一種基于體外環(huán)化基因組DNA的檢測方法。該方法將基因組DNA片段化后環(huán)化，使用Cas9蛋白和gRNA進行體外切割，通過高通量測序識別切割位點。該方法具有較高靈敏度，可檢測低頻脫靶事件。3.1.2 Digenome-seqDigenome-seq直接在體外用Cas9處理基因組DNA，通過全基因組測序?qū)ふ译p鏈斷裂位點。該方法不需要復(fù)雜的DNA處理步驟，操作相對簡單。3.2 體內(nèi)檢測技術(shù)體內(nèi)檢測方法直接在細(xì)胞或生物體中進行脫靶分析，更接近實際應(yīng)用場景。3.2.1 GUIDE-seqGUIDE-seq通過在細(xì)胞中導(dǎo)入雙鏈寡核苷酸標(biāo)簽，標(biāo)記DNA雙鏈斷裂位點。這些標(biāo)簽會整合到斷裂位點，通過測序可識別編輯工具產(chǎn)生的所有切割位點，包括目標(biāo)位點和脫靶位點。3.2.2 DISCOVER-seqDISCOVER-seq利用DNA損傷修復(fù)過程中產(chǎn)生的特定標(biāo)記來識別編輯位點。該方法不需要外源標(biāo)簽，通過檢測內(nèi)源性的修復(fù)信號實現(xiàn)脫靶檢測。3.3 生物信息學(xué)預(yù)測工具多種生物信息學(xué)工具被開發(fā)用于預(yù)測潛在的脫靶位點，如Cas-OFFinder、CRISPResso等。這些工具基于序列相似性算法，可以快速預(yù)測gRNA可能結(jié)合的基因組區(qū)域。脫靶切割位點已在基因編輯技術(shù),CRISPR / Cas9,ZFNs和TALEN。寧波種子基因脫靶檢測報告

脫靶檢測實驗室，推薦唯可生物，實驗實力強，專業(yè)性高，檢測效率高，結(jié)果準(zhǔn)確率高。江蘇基因療法脫靶檢測評估標(biāo)準(zhǔn)

基因編輯技術(shù)，特別是CRISPR-Cas系統(tǒng)和MicroRNA技術(shù)，在生物醫(yī)學(xué)研究中展現(xiàn)出了巨大的潛力。然而，這些技術(shù)也面臨一個共同的挑戰(zhàn)——脫靶效應(yīng)（Off-target Effect）。脫靶效應(yīng)指的是基因編輯工具在靶向特定基因時，意外地對其他非目標(biāo)基因進行編輯或調(diào)控，可能導(dǎo)致意外的生物學(xué)后果。因此，脫靶檢測成為確?；蚓庉嫾夹g(shù)安全性和有效性的關(guān)鍵步驟。本文將探討脫靶效應(yīng)的原理、影響以及現(xiàn)有的脫靶檢測技術(shù)。脫靶效應(yīng)的產(chǎn)生主要源于基因編輯工具與目標(biāo)DNA序列之間的非特異性結(jié)合。以CRISPR-Cas系統(tǒng)為例，其工作原理是通過導(dǎo)向RNA（gRNA）識別并結(jié)合特定的DNA序列，然后Cas酶在目標(biāo)位點進行切割。江蘇基因療法脫靶檢測評估標(biāo)準(zhǔn)