鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑，可用于細胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長。制備鼠尾膠原方法：1、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘；2、手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱；3、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡；4、重復(fù)步驟2、3，直至尾腱量夠用；5、吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）；6、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎，轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中；7、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液；8、搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期；9、離心，4000轉(zhuǎn)/分，10-15分鐘；10、吸取上清，分裝成小瓶，4℃保存。制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。廣州鼠尾膠原直銷廠家

一種海貍鼠尾膠原手術(shù)縫合線制備方法，其特征在于，步驟如下：(1)膠原紡絲液的配制：將備用的海貍鼠尾筋切成薄片，用無花果蛋白酶進行酶解處理，再用雙氧水溶液殺酶；將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗，然后用乙酸溶液溶脹，把溶脹后的切片分散攪拌，然后用濾網(wǎng)過濾，除去雜質(zhì)及不溶脹物，然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液；(2)手術(shù)縫合線纖維的成形：將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中，用氮氣擠壓入含有pH＝8-11、質(zhì)量濃度為50-80％的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型，再經(jīng)過質(zhì)量濃度為60-90％的乙醇水溶液的脫水浴脫水，再經(jīng)過假捻器加捻，合股后再進入含有pH＝9-11、質(zhì)量濃度為0.8-1.2％戊二醛的交聯(lián)浴中交聯(lián)，經(jīng)過水浴水洗，再經(jīng)第二次加捻，除去水及交聯(lián)劑，干燥后，在卷繞輥上卷繞即得手術(shù)縫合線。北京鼠尾膠原生產(chǎn)廠家利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。

膠原蛋白的提取方法：酸法提取：酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備，但產(chǎn)品得率低，設(shè)備腐蝕嚴重，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下從牛腱中提取膠原蛋白，得到高純度的膠原蛋白溶液。

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達到一定量時，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中。

膠原蛋白的提取方法：酶法提取：酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解，水解條件溫和，反應(yīng)速率快，提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結(jié)構(gòu)，蛋白純度高，理化性質(zhì)穩(wěn)定，且無環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復(fù)合酶。工藝可選擇一步法，即利用酶液直接提取；二步法，即先用酸或者堿進行初步提取，然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預(yù)處理革屑，然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產(chǎn)物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶，再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產(chǎn)物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白，探討了酶和酶的加入量對提取結(jié)果的影響，給出了酶對膠原提取較佳工藝配比，酶與牛腱的質(zhì)量比為0.1時效果較佳，而使用無花果蛋白酶時，0.01的配比較佳。鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠3種基質(zhì)對體外培養(yǎng)角膜上皮細胞增殖的影響。青島正規(guī)鼠尾膠原廠家批發(fā)價

包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間。廣州鼠尾膠原直銷廠家

含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。廣州鼠尾膠原直銷廠家

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