細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：1、細(xì)胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)1ml細(xì)胞液要加10ml－15m培養(yǎng)液，而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。2、復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題：試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細(xì)胞濃度過低，不利于細(xì)胞的貼壁。3、加培養(yǎng)基的量放入問題：這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會(huì)比較大，就會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響，還有一個(gè)說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能：既適用于一般培養(yǎng)細(xì)胞的凍存，也適用于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。杭州貴陽無血清細(xì)胞凍存液

無血清快速細(xì)胞凍存液，是一種新型的快速凍存細(xì)胞的保護(hù)液，可將細(xì)胞置于-80^C直接冷凍保存。NM4100內(nèi)含天然抗凍蛋白（Naturalantifrereprotein），不含動(dòng)物來源的血清成分，能夠有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力，減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細(xì)胞安全，能夠滿足大部分體外培養(yǎng)細(xì)胞的凍存需求。無血清凍存液使用方法：1、收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞，離心去除上清培養(yǎng)液。2、加入適量的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，調(diào)節(jié)密度至1-5x10*↑/mL。3、將加有凍存液的細(xì)胞懸液分裝至凍存管中。4、將凍存管直接轉(zhuǎn)移至-80C水箱中冷凍保存。5、儲(chǔ)存條件：2-8C保存，年有效：-20C保存，兩年有效。寧波長(zhǎng)沙無血清細(xì)胞凍存液不同的凍存方法替代了不同的凍存體系。

凍存方式：按照凍存保護(hù)液在凍結(jié)后是否形成冰晶來劃分，凍存方法可分為非玻璃化和玻璃化凍存兩種。非玻璃化凍存是利用各種溫級(jí)的冰箱分階段降溫至-70℃～-80℃，然后直接投入液氮進(jìn)行保存；或者是利用電子計(jì)算機(jī)程控降溫儀以及利用液氮的氣、液，按一定的降溫速率從室溫降至-100℃以下，再直接投入液氮保存的方法。以該種方法凍結(jié)的細(xì)胞懸液或多或少都有冰晶的形成。玻璃化凍存則是指利用多種高濃度的冷凍保護(hù)劑聯(lián)合形成的玻璃化冷凍保護(hù)液保護(hù)懸浮細(xì)胞，直接投入液氮進(jìn)行凍存的方法。以該中方法凍結(jié)的細(xì)胞懸液沒有冰晶的形成。但目前細(xì)胞凍存較常用的仍是前一種方法。

細(xì)胞凍存秘籍：細(xì)胞凍存對(duì)于大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞，通常每分鐘下降-1至-3℃。控制冷卻過程的較好方法是使用程序降溫系統(tǒng)。如果沒有程序降溫系統(tǒng)，可以使用程序降溫盒，然后將其置于-70℃至-90℃冰箱中過夜。雖然這種方法適用于許多細(xì)胞系，但不能提供可控的，均勻的或可重復(fù)的冷卻，不建議用于珍貴細(xì)胞。無論使用哪種冷卻方法，重要的是快速高效地將其傳輸?shù)捷^終存儲(chǔ)位置。如果轉(zhuǎn)移不能立即完成，可以將小瓶置于干冰上一段時(shí)間。這樣可以避免在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生溫度升高而損害細(xì)胞。在這個(gè)轉(zhuǎn)移過程中溫度升高是解凍后影響細(xì)胞活力的主要原因。無血清細(xì)胞凍存液，2-8℃保存即可，無需再進(jìn)行分裝。

無血清細(xì)胞凍存液對(duì)比含血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì)：傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液。含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)（或隔夜），較后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個(gè)小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量的死亡。）無血清細(xì)胞凍存液使用方法：加入適量的無血清型細(xì)胞凍存液于離心管中。蕪湖正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液推薦廠家

無血清凍存液使用方法：將凍存管直接轉(zhuǎn)移至-80C水箱中冷凍保存。杭州貴陽無血清細(xì)胞凍存液

含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時(shí)遇到的問題：1.凍存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購(gòu)買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣，耗時(shí)耗力。3.含血清，細(xì)胞污染(細(xì)菌、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高。4.血清批次、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。Cellregen無血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動(dòng)物源成分，含DMSO、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液。Cellregen無血清細(xì)胞凍存液的凍存方法是：將細(xì)胞凍存懸液（凍存管或孔板）直接放置-80℃冰箱長(zhǎng)期保存。杭州貴陽無血清細(xì)胞凍存液