鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原代培養(yǎng)中的應用：在國外的藥理,毒理和皮膚病學的研究領域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細胞的材料和方法r1]實驗材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細胞的分離和細胞懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細胞懸液,加入細胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣。制備鼠尾膠原：手持尾巴，用止血鉗夾住鼠尾的，折斷尾骨后拉出尾腱。上海濟南鼠尾膠原

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結構，此法不可取。2.鹽法提取：鹽法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下，當鹽的濃度達到一定量時，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。石家莊正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家4°C沉淀10小時，去除上清液，絮狀溶液高速冷凍離心處理，收集沉淀。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(，其生物力學強度極差，一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進行SDS-PAGE，結果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質量130000附近有明顯條帶，另一條帶的相對分子質量大于170000(圖2)。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進行TEM和電子衍射觀察。

鼠尾膠原蛋白耗子尾汁還能變得更加，一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴，制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提、氯化鈉沉淀和磷酸氫二鈉沉淀等步驟，才能從鼠尾中獲得珍貴的膠原蛋白。這種膠原蛋白在37℃的條件下會形成3股螺旋結構，可以用來當作細胞培養(yǎng)的基質。細胞培養(yǎng)過程中，細胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面（懸浮培養(yǎng)細胞除外）才能完成生長過程，而有一些細胞卻總是不太給力，自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難，這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔起讓細胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層（coating），給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后，細胞就能更好地貼附上去，除了培養(yǎng)皿，一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細胞，同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細胞貼壁生長。不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出。

膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成。在人的身體中這是皮膚、筋、軟骨、骨骼及結締組織的較主要的蛋白質。膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一，不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸，有脯氨酸和羥脯氨酸。根據(jù)其遺傳分子結構遺傳基因的差別，膠原蛋白分為20幾個亞型。但較為常見的為Ι、Π、ΙΙΙ型膠原蛋白，即間質膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質優(yōu)良。鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠。昆明正規(guī)鼠尾膠原進貨價

可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。上海濟南鼠尾膠原

鼠尾膠原實驗應用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞，細胞角蛋白18表達陽性，免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。上海濟南鼠尾膠原