培養(yǎng)基的制備原則和要求：培養(yǎng)基是根據(jù)各類微生物生長繁殖的需要，用人工方法把多種物質(zhì)混合而成的營養(yǎng)物。一般用來分離、培養(yǎng)菌類。常用的培養(yǎng)基有基礎(chǔ)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基和厭氧培養(yǎng)基。在制備培養(yǎng)基時，應(yīng)掌握如下原則和要求：(一)培養(yǎng)基必須含有細菌生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)。所用的化學(xué)藥品必須純凈，稱取的份量務(wù)必準(zhǔn)確。(二)培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細菌生長要求。按各種培養(yǎng)基要求準(zhǔn)確測定調(diào)節(jié)pH值。多數(shù)細菌生長的適宜pH值為7.2～7.6，呈弱堿性。**電加熱**（帶溫控的磁力攪拌器）：建議選擇功率可調(diào)、加熱均勻的型號。福建自動培養(yǎng)基制備器

實驗室在制作培養(yǎng)基時候的經(jīng)驗總結(jié)：1、培養(yǎng)基成份稱量：培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂，較好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方上做出記號，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還應(yīng)進行一次檢查。2、培養(yǎng)基成份的混合與溶化：培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細菌不易生長。較好使用不銹鋼加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置于高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。河南瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備器**內(nèi)置冷卻系統(tǒng)**：部分培養(yǎng)基制備器配備水循環(huán)冷卻或風(fēng)扇冷卻功能。

培養(yǎng)基的滅菌：培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌，各種培養(yǎng)基的滅菌時間和壓力，按其成分不同而定。普通培養(yǎng)基采用121℃、滅菌15min，但容器和裝量較大時，應(yīng)延長至20min。含糖培養(yǎng)基115℃、滅菌30min。含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，連續(xù)3d，間歇滅菌。血清或組織液，采用低熱56—58水浴1h，連續(xù)5—6d滅菌，一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等，可用細菌過濾器，過濾除菌。高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，必須逐漸加熱，徹底排除滅菌器內(nèi)的空氣，再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時間，達到全部殺滅微生物。以上的滅菌時間和溫度要經(jīng)過驗證確認(rèn)，如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時宜采用115℃、滅菌30min為好。

培養(yǎng)基的實驗室制備：1.水：除特定要求,實驗室用水的電導(dǎo)率在25℃下應(yīng)不高于25uS/cm(相當(dāng)于電阻率≥0.4MΩcm)。微生物污染應(yīng)不超過103CFU/mL，較好低于102CFU/mL。應(yīng)根GB/T5750.12或其他有效方法,定期檢驗微生物的污染。2.稱量和復(fù)水：稱量所需量的脫水培養(yǎng)基(注意防止吸入粉末，尤其是含有有害物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊)后再加水至所需的量。3.溶解和分裝：脫水培養(yǎng)基加水后適當(dāng)加熱,并不攪拌使其快速溶解，必要時，重新溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱溶解前應(yīng)浸泡幾分鐘。頻繁報錯建議導(dǎo)出日志進行專業(yè)診斷。

分裝：配制好的培養(yǎng)基根據(jù)不同的用途分裝在三角瓶、試管等容器中，分裝試管，如果試管量很大，可用自動分液器。如果試管量少，可用漏斗分裝。分裝量不超過容器容積的三分之二。三角瓶以不超過容積的二分之一為宜；瓊脂斜面以不超過試管長度的五分之一為宜，滅菌后，擺成的斜面為培養(yǎng)基的三分之一、底層為三分之二的量為宜；半固體瓊脂分裝量為試管長度的的三分之一；用來接種或保菌的高層瓊脂，分裝量為試管長度的四分之一或三分之一，用來接種厭氧菌的要達到三分之二；瓊脂平板，內(nèi)徑90mm的以13ml~15ml為宜，內(nèi)徑70mm的平板為8ml~10ml，制成的瓊脂平板。參數(shù)設(shè)置丟失需更換備用電池或存儲器。黑龍江Systec培養(yǎng)基制備器

高溫下長時間停留會導(dǎo)致瓊脂過度凝固、糖類焦化或蛋白質(zhì)變性。福建自動培養(yǎng)基制備器

培養(yǎng)基制備技術(shù)：一、玻璃器皿的清洗：在制備培養(yǎng)基的過程中，首先要使用一些玻璃器皿，如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況，經(jīng)過一定的處理，洗刷干凈。有的還要進行包裝，經(jīng)過滅菌等準(zhǔn)備就緒后，才能使用。1、新購的玻璃器皿：除去包裝沾染的污垢后，先用熱肥皂水刷洗，流水沖凈，再浸泡于１～２％的工業(yè)鹽酸中數(shù)小時，使游離的堿性物質(zhì)除去，再以流水沖凈。對容量較大的器皿，如大燒瓶、量筒等，洗凈后注入濃鹽酸少許，轉(zhuǎn)動容器使其內(nèi)部表面均沾有鹽酸，數(shù)分鐘后傾去鹽酸，再以流水沖凈，倒置于洗滌架上將水空干，即可使用。2、用過的玻璃器皿：凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿，使用后可隨時沖洗，吸取過化學(xué)試劑的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定數(shù)量后再集中進行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必須經(jīng)過適當(dāng)消毒后，將污垢除去，用皂液洗刷，再用流水沖洗干凈。福建自動培養(yǎng)基制備器