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美國多通道膜片鉗高阻抗封接

來源: 發(fā)布時間:2025-01-17

膜片鉗的應用范圍:1.單離子通道(如鈉、鉀)的功能研究;2.心肌細胞離子通道研究(尤其與藥物作用相關的);3.常規(guī)與病理的離子通道作用機制研究;4.單細胞的形態(tài)與功能關系的研究;5.心血管藥理學的研究;6.腦片膜片鉗(證實了腦組織在體外也能存活并保持很好的活性狀態(tài),能使對腦細胞的研究更接近生理狀態(tài)下的情況,可檢驗不同腦區(qū)間的神經(jīng)通路與功能鏈接);7.神經(jīng)環(huán)路的研究(光遺傳或化學遺傳病毒載體表達的驗證);8.神經(jīng)突觸可塑性的研究。由于膜片鉗檢測的是PA級的微電流信號,因此需要特殊的放大器及模數(shù)轉換器。美國多通道膜片鉗高阻抗封接

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不同的全自動膜片鉗技術所采用的原理如PopulationPatchClamp技術∶同SealChip技術一樣,完全摒齊了玻璃電極,而是采用PatchPlate平面電極芯片。該芯片含有多個小室,每個小室中含有很多1-2μm的封接孔。在記錄時,每個小室中封接成功的細胞|數(shù)目較多,獲得的記錄是這些細胞通道電流的平均值。因此,不同小室其通道電流的一致性非常好,變異系數(shù)很小。美國Axon(MDS)公司采用這一技術研發(fā)出了全自動高通量的lonWorksQuattro系統(tǒng),成為藥物初期篩選的金標準滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*39小時隨時人工在線咨詢.雙分子層膜片鉗技術全自動膜片鉗技術的出現(xiàn)標志著膜片鉗技術已經(jīng)發(fā)展到了一個嶄新階段。

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離子通道的近代觀念源于Hodgkin、Huxley、Katz等人在20世紀30—50年代的開創(chuàng)性研究。在1902年,Bernstein創(chuàng)造性地將Nernst的理論應用到生物膜上,提出了“膜學說”。他認為在靜息狀態(tài)下,細胞膜只對鉀離子具有通透性;而當細胞興奮的瞬間,膜的破裂使其喪失了選擇通透性,所有的離子都可以自由通過。Cole等人在1939年進行的高頻交變電流測量實驗表明,當動作電位被觸發(fā)時,雖然細胞的膜電導大為增加,但膜電容卻只略有下降,這個事實表明膜學說所宣稱的膜破裂的觀點是不可靠的。1949年Cole在玻璃微電極技術的基礎上發(fā)明了電壓鉗位(voltageclamptechnique)技術滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*59小時隨時人工在線咨詢.

膜片鉗技術是由諾貝爾獎獲得者Neher和Sakmann于1976年發(fā)展起來的一種記錄細胞膜離子通道電生理活動的技術。該技術的應用連接了細胞水平和分子水平的生理學研究,已成為現(xiàn)代細胞電生理學研究的常規(guī)方法。它廣泛應用于生物學、生理學、病理學、藥理學、神經(jīng)科學、植物和微生物學,并取得了豐碩的研究成果。膜片鉗技術點燃了細胞和分子水平生理學研究的**之火,并與基因克隆技術并駕齊驅,給生命科學研究帶來了巨大的推動力。鈣成像技術***用于實時監(jiān)測神經(jīng)元、心肌和各種細胞內鈣離子的變化,從而檢測神經(jīng)元和心肌的活動。這些技術是人們觀察神經(jīng)和各種細胞活動的直接手段,現(xiàn)已發(fā)展成為生命科學研究的熱點,也是國家自然科學基金鼓勵申報的重要領域。準確捕捉離子通道動態(tài),膜片鉗技術助您一臂之力!

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全細胞記錄構型(whole-cellrecording)高阻封接形成后,繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內細胞膜破裂,電極胞內液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,或將玻管連到標準高阻微電極放大器上記錄。在電壓鉗條件下記錄到的大細胞全細胞電流可達nA級,全細胞鉗的串聯(lián)電阻(玻管和細胞內部之間的電阻)應當補償。任何流經(jīng)膜的電流均流經(jīng)這一電阻,所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細胞內的真正電位。電流愈大,愈需對串聯(lián)電阻進行補償。全細胞鉗應注意細胞必需合理的小到其電流能被放大器測到的范圍(25~50nA)。減少串聯(lián)電阻的方法是玻管尖要比單通道記錄大。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*29小時隨時人工在線咨詢.電壓鉗技術的主要在于將膜電位固定在指令電壓的水平,這樣才能研究在給定膜電位下膜電流隨時間的變化關系。美國全自動膜片鉗腦片

通過研究離子通道的離子流, 從而了解離子運輸、信號傳遞等信息。美國多通道膜片鉗高阻抗封接

在形成高阻抗封接后,記錄實驗結果之前,通常要根據(jù)實驗的要求進行參數(shù)補償,以期獲得符合實際的結果。需要注意的是,應恰當設置放大器的帶寬,例如10kHz,這樣在電流監(jiān)測端將觀察不到超越此頻帶以外的無用信息。膜片鉗實驗難度大、技術要求高,要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經(jīng)過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內、外液,如何選擇阻斷劑、激動劑,如何進行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復雜的問題,還需在科研實踐中不斷地探索和解決。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*56小時隨時人工在線咨詢.美國多通道膜片鉗高阻抗封接

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