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來源: 發(fā)布時間:2021-09-11

實驗溶液浸溶細胞溶液和微電極玻璃管內的填充液成分對全細胞膜片鉗記錄也是很重要的內容,這關系到封接的容易程度、細胞存活狀態(tài)及膜電位的狀態(tài)等。在實驗記錄過程中,尤其是神經生物學實驗,需要迅速更換細胞浸溶液濃度以免受體敏感性降低(desensitization)或需要模擬快速突觸反應的壽命。原則上細胞的浸溶液成分或玻璃管內填充液成分應該與細胞外或細胞內間質的成分相似,實際研究中,為了探討某些通道或電位特性,對這些實驗溶液的成分或濃度會作必要調整,沒有哪種溶液是理想的。膜片鉗技術實現了小片膜的孤立和高阻封接的形成。美國高通量全自動膜片鉗廠家

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光遺傳學調控技術是近幾年正在迅速發(fā)展的一項整合了光學、基因操作技術、電生理等多學科交叉的生物技術。NatureMethods雜志將此技術評為"Methodoftheyear2010"[19];美國麻省理工學院科技評述(MITTechnologyReview,2010)在其總結性文章"Theyearinbiomedicine"中指出:光遺傳學調控技術現已經迅速成為生命科學,特別是神經和心臟研究領域中熱門的研究方向之一。目前這一技術正在被全球幾百家從事心臟學、神經科學和神經工程研究的實驗室使用,幫助科學家們深入理解大腦的功能,進而為深刻認識神經、精神疾病、心血管疾病的發(fā)病機理并研發(fā)針對疾病干預和的新技術。芬蘭單通道膜片鉗電生理技術細胞是動物和人體的基本組成單元,細胞與細胞內的通信,是依靠其膜上的離子通道進行的。

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對電極持續(xù)施加一個1mV、10~50ms的階躍脈沖刺激,電極入水后電阻約4~6MΩ,此時在計算機屏幕顯示框中可看到測試脈沖產生的電流波形。開始時增益不宜設得太高,一般可在1~5mV/pA,以免放大器飽和。由于細胞外液與電極內液之間離子成分的差異造成了液結電位,故一般電極剛入水時測試波形基線并不在零線上,須首先將保持電壓設置為0mV,并調節(jié)“電極失調控制“使電極直流電流接近于零。用微操縱器使電極靠近細胞,當電極前列與細胞膜接觸時封接電阻指示Rm會有所上升,將電極稍向下壓,Rm指示會進一步上升。通過細塑料管向電極內稍加負壓,細胞膜特性良好時,Rm一般會在1min內快速上升,直至形成GΩ級的高阻抗封接。一般當Rm達到100MΩ左右時,電極前列施加輕微負電壓(-30~-10mV)有助于GΩ封接的形成。此時的現象是電流波形再次變得平坦,使電極超極化由-40到-90mV,有助于加速形成封接。為證實GΩ封接的形成,可以增加放大器的增益,從而可以觀察到除脈沖電壓的首尾兩端出現電容性脈沖前列電流之外,電流波形仍呈平坦狀。

與藥物作用有關的心肌離子通道,心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。近年來,國外學者在人類心肌細胞離子通道特性的研究中取得了許多進展,使得心肌藥理學實驗由動物細胞模型向人心肌細胞成為可能。對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究,通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。如對鈣離子在腦缺血神經細胞損害中作用機制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+介導現象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進入細胞內就出現Ca2+超載,導致神經元及細胞膜損害,膜轉運功能障礙,嚴重的可使神經元壞死。離子通道是一種特殊的膜蛋白,它橫跨整個膜結構,是細胞內部與部外聯系的橋梁和細胞內外物質交換的孔道。

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細胞是動物和人體的基本組成單元,細胞與細胞內的通信,是依靠其膜上的離子通道進行的,離子和離子通道是細胞興奮的基礎,亦即產生生物電信號的基礎,生物電信號通常用電學或電子學方法進行測量。由此形成了一門細胞學科———電生理學(electrophysiology),即是用電生理的方法來記錄和分析細胞產生電的大小和規(guī)律的科學。早期的研究多使用雙電極電壓鉗技術作細胞內電活動的記錄?,F代膜片鉗技術是在電壓鉗技術的基礎上發(fā)展起來的。在膜電位改變時,在電場的作用下,重新分布導致通道的關閉,同時有電荷移動,稱為門控電流。可升級膜片鉗單細胞

Neher將膜片鉗技術與Fura 2 熒光測鈣技術結合。美國高通量全自動膜片鉗廠家

過去認為,膜片鉗只能在培養(yǎng)細胞或酶解的細胞上進行,這樣得到的細胞膜表面比較光滑,才能夠形成高阻封接,但缺點是組織的正常三維結構被破壞,并且對神經中樞內突觸特有的傳遞機能的研究無法展開。于是,一些學者建立了組織切片膜片鉗技術(Slicepatch),就能在哺乳動物腦片制備上做全細胞記錄。1992年,在腦片膜片鉗技術上,美國Ferster實驗室報道在在體貓的視皮層用膜片鉗全細胞記錄研究了視刺激誘發(fā)的興奮性和***性突觸后電位相互影響及節(jié)律性膜電位的變化規(guī)律。1993年,德國的Dodt和Sakmann合作,利用紅外電視顯微鏡監(jiān)視,使得膜片鉗記錄不但能夠在神經元胞體及其樹突上進行,而且可同時在這兩個不同的部位作膜片鉗記錄。美國高通量全自動膜片鉗廠家

與膜片鉗相關的擴展資料:

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膜片鉗又稱單通道電流記錄技術,用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100的密封(giga-seal),又稱巨阻封接,被孤立的小膜片面積為μm量級,內中*有少數離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,可測量單個離子通道開放產生的pA(10的負12次方安培)量級的電流,這種通道開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放和關閉的電流變化,可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量,并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。還可把吸管吸附的膜片從細胞膜上分離出來,以膜的外側向外或膜的內側向外等方式進行實驗研究。這種技術對小細胞的電壓鉗位、改變膜內外溶液成分以及施加藥物都很方便。 1976年德國馬普生物物理化學研究所Neher和Sakmann***在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh***的單通道離子電流,從而產生了膜片鉗技術。
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