FHIRM-TPM 2.0擴大了微型雙光子顯微鏡的適用性和實用性，使神經(jīng)科學(xué)家能夠更自由地探索更多新的行為范式，包括身體運動、長時程的復(fù)雜過程，如學(xué)習(xí)和記憶，社會互動和恐懼條件反射，甚至是慢性疾病的進展和老化，如神經(jīng)發(fā)生和再生，疾病進展和衰老，以破譯大腦的奧秘。在一批“早鳥項目”中，該系統(tǒng)已被多個研究組應(yīng)用于不同的模式動物和行為范式，如小鼠的社交新穎性識別、斑胸草雀受***調(diào)控后大腦特定神經(jīng)元變化、新型神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿探針的傳導(dǎo)適應(yīng)性分析以及獼猴三腦區(qū)成像等多項研究。依托兩代微型化雙光子成像技術(shù)，該團隊還在南京市江北新區(qū)建立了規(guī)模化高通量腦功能成像的南京腦觀象臺（Nanjing Brian Observatory），于2020年12月10日舉辦了落成典禮。通過與世界范圍內(nèi)的神經(jīng)科學(xué)家進行廣合作，腦觀象臺現(xiàn)正在服務(wù)三十多個科研項目，成為開展大型腦科學(xué)問題研究的重要科研服務(wù)平臺。雙光子顯微鏡明日之星--FemtoFiber ultra 920 。國外雙光子顯微鏡ultimainvestigator

1990年初，當(dāng)WinfriedDenk剛從康奈爾大學(xué)博士畢業(yè)準備前往瑞士讀博后時，他看了一本關(guān)于激光掃描顯微鏡的書，從中了解到非線性光學(xué)效應(yīng)——強光和物質(zhì)的相互作用。當(dāng)時，Denk有同事研究生物樣品中的鈣離子但苦于沒有強大的紫外激光器和光學(xué)元件，于是他就想到如果使用雙光子吸收就能夠繞開紫外，換言之，與其通過一個紫外光子激發(fā)標記的鈣離子，通過兩個雙倍波長的可見光光子也能激發(fā)相同的熒光。有了想法后馬上實驗。借了一套染料飛秒激光器，Denk聯(lián)合他的導(dǎo)師WattWebb及其博士生JamesStrickler只用六個小時就完成了實驗搭建，采集數(shù)據(jù)則用了兩到三天，于是一篇里程碑式的文章就此誕生了。進口激光熒光雙光子顯微鏡雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化，結(jié)合它的特點，大致可以分成深和活兩個方面的提升。

對生物樣品的三維觀測是了解細胞功能的重要方法之一。目前已有的三維熒光成像技術(shù)包括光片顯微成像技術(shù)、晶格光照明技術(shù)以及激光掃描顯微成像技術(shù)（如共聚焦顯微鏡及雙光子顯微鏡）等。其中激光掃描顯微鏡利用旋轉(zhuǎn)盤可以進行多焦點的激光掃描，提高時間分辨率，而且有利于減少活細胞成像中的光損傷。本篇文獻主要實現(xiàn)了可見光雙光子激發(fā)及多焦點激光掃描的結(jié)合，終提高了3D延時掃描中的空間分辨率及成像對比度，同時這也是可見光雙光子激發(fā)（v2PE）在超高分辨率顯微鏡中的應(yīng)用。

使用雙光子顯微鏡（2PM）可以以亞細胞分辨率對鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器成像，從而測量不透明大腦深處的活動；成像膜電壓變化能直接反映神經(jīng)元活動，但神經(jīng)元活動的速度對于常規(guī)的2PM來說太快。目前電壓成像主要通過寬場顯微鏡實現(xiàn)，但它的空間分辨率較差并且只是于淺層深度。因此要在不透明的大腦中以高空間分辨率對膜電壓變化進行成像，需要較提高2PM的成像速率。FACED模塊輸出處的子脈沖序列可以看作從虛擬光源陣列發(fā)出的光，這些子脈沖在中繼到顯微鏡物鏡后形成了一個空間上分離且時間延遲的焦點陣列。然后將該模塊并入具有高速數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)的標準雙光子熒光顯微鏡中，如圖2所示。光源是具有1MHz重復(fù)頻率的920nm的激光器，通過FACED模塊可產(chǎn)生80個脈沖焦點，其脈沖時間間隔為2ns。這些焦點是虛擬源的圖像，虛擬源越遠，物鏡處的光束尺寸越大，焦點越小。光束沿y軸比x軸能更好地充滿物鏡，從而導(dǎo)致x軸的橫向分辨率為0.82μm，y軸的橫向分辨率為0.35μm。雙光子顯微鏡是結(jié)合了雙光子激發(fā)技術(shù)和激光掃描共聚顯微鏡。

而配合了雙光子激發(fā)技術(shù)，激光共聚掃描顯微鏡則能更好得發(fā)揮功效。那么，什么是雙光子激發(fā)技術(shù)呢？在高光子密度的情況下，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子使電子躍遷到較高能級，經(jīng)過一個很短的時間后，電子再躍遷回低能級同時放出一個波長為長波長一半的光子（P=h/λ）。利用這個原理，便誕生了雙光子激發(fā)技術(shù)。雙光子顯微鏡使用長波長脈沖激光，通過物鏡匯聚，由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，而物鏡焦點處的光子密度是比較高的，所以只有在焦點處才能發(fā)生雙光子激發(fā)，產(chǎn)生熒光，該點產(chǎn)生的熒光再穿過物鏡，被光探頭接收，從而達到逐點掃描的效果。雙光子顯微鏡非常適合對細胞組織進行長時間在體成像。國內(nèi)ultimainvestigator雙光子顯微鏡聯(lián)系方式

雙光子顯微鏡為什么穿透能力強?國外雙光子顯微鏡ultimainvestigator

雙光子技術(shù)在醫(yī)療診斷應(yīng)用中具有巨大的潛力，該領(lǐng)域還未形成標準和體系，需要系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)研究與龐大的醫(yī)療數(shù)據(jù)加以支撐，通過研究人體基于多光子成像技術(shù)，進行細胞結(jié)構(gòu)、生化成分、微環(huán)境、組織形態(tài)、代謝功能的影響信息，找到與疾病的細胞學(xué)、分子生物學(xué)、組織病理學(xué)、診斷和特征的關(guān)聯(lián)關(guān)系，共同探究生理病理基礎(chǔ)和分子細胞生物學(xué)機制，篩選鑒定、皮膚病、自身免疫病及其他疑難疾病的診斷及鑒別診斷依據(jù)，建立全新的多光子細胞診斷的完整數(shù)據(jù)庫，定義出針對不同疾病的多光子臨床檢測設(shè)備的產(chǎn)品標準。討論環(huán)節(jié)，來自病理科、呼吸中心、心臟科、神經(jīng)科、皮膚科及研究所的多位醫(yī)師及研究人員紛紛結(jié)合各自的工作領(lǐng)域與王愛民副教授展開了熱烈的討論，其中毛發(fā)中心楊頂權(quán)主任計劃再次邀請王愛民副教授進行學(xué)術(shù)交流。通過本次學(xué)術(shù)交流，病理科與研究所分別與王愛民副教授課題組達成了初步合作意向。國外雙光子顯微鏡ultimainvestigator