原代肝細胞的體外培養(yǎng)和研究有著很大的應(yīng)用范圍。原代肝細胞(Primaryhepatocytes)是指從動物肝臟取出后立即培養(yǎng)的肝細胞。原代肝細胞作為一種體外模型，具有其它體外模型不可替代的優(yōu)點：1.與體內(nèi)環(huán)境保持一致，酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度，可以在接近生理狀態(tài)的的情況下研究藥物的代謝和毒性；2.較好保留酶水平和維持了肝細胞的完整形態(tài)和肝細胞體外代謝活性，真實反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況。3.隨著技術(shù)水平的不斷提高，原代培養(yǎng)的動物和人肝細胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究：4.探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學(xué)的研究；5.評價藥物和外源性物質(zhì)對肝臟中細胞色素P450酶誘導(dǎo)作用并探討其誘導(dǎo)機制；6.預(yù)測和解釋藥物與藥物之間的相互作用；7.研究藥物的細胞毒性等。因此了解或者掌握原代肝細胞體外培養(yǎng)和研究的相關(guān)技術(shù)對于提升相關(guān)試驗的成功率非常有幫助。立沃生物的原代肝細胞配套提供完備的細胞培養(yǎng)服務(wù)，為客戶提供個性化的解決方案，使客戶滿意放心。廣州小鼠原代肝細胞懸浮
原代肝細胞也被多方面應(yīng)用于嵌合體肝模型當中。通過將正常人原代肝細胞移植到患有嚴重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)的肝特異uPA轉(zhuǎn)基因小鼠中，可以成功地構(gòu)建嵌合體肝。而轉(zhuǎn)基因小鼠的uPA表達能夠促使鼠肝細胞死亡，從而為人原代肝細胞的移植、重建和增殖提供了一個適宜的微環(huán)境。在這種重建的嵌合體肝內(nèi)，人肝細胞占據(jù)了大約75％的比例，并且能夠持續(xù)高水平地表達人血清蛋白。通過使用病人血清和病毒核酸影響這種嵌合體小鼠，研究人員發(fā)現(xiàn)在肝內(nèi)可以檢測到病毒的RNA。然而，病理觀察并未發(fā)現(xiàn)病毒影響所導(dǎo)致的細胞病變。這一發(fā)現(xiàn)為研究病毒影響的機制提供了新的途徑，并為開發(fā)解決病毒影響的新方法提供了新的思路。此外，這項研究還為研究肝細胞移植和重建提供了新的實驗?zāi)Ｐ汀Ｍㄟ^將人原代肝細胞移植到轉(zhuǎn)基因小鼠中，研究人員可以更好地研究原代肝細胞的生長、分化和功能，從而為克服肝病提供新的思路和方法。這項研究的結(jié)果具有重要的臨床意義，有望為克服肝病和病毒影響提供新的策略。廣東鮭魚原代肝細胞鑒定立沃生物原代肝細胞配套有專業(yè)的技術(shù)團隊，對后續(xù)的細胞復(fù)蘇，培養(yǎng)，實驗開展提供有力的技術(shù)保障。
原代肝細胞的分離方法有很多種，以下是其中四種常見的方法：1.膠原酶消化法：膠原酶是一種使用廣的細胞分離酶，可以消化肝細胞外基質(zhì)中的膠原蛋白，從而使肝細胞分離出來。該方法通常使用膠原酶消化肝臟組織，然后通過離心和過濾等步驟分離肝細胞。2.機械分離法：機械分離法是一種通過物理方法分離肝細胞的方法。該方法通常使用攪拌器、濾網(wǎng)或離心等設(shè)備將肝臟組織中的肝細胞分離出來。3.酶消化結(jié)合機械分離法：這種方法是將膠原酶消化和機械分離相結(jié)合的方法。該方法通常先使用膠原酶消化肝臟組織，然后通過機械分離的方法將肝細胞分離出來。4.密度梯度離心法：密度梯度離心法是一種通過離心的方法分離肝細胞的方法。該方法通常使用密度梯度介質(zhì)（如Percoll或Ficoll）將肝細胞分離出來。以上是幾種常見的原代肝細胞分離方法，不同的方法適用于不同的實驗需求和研究目的。在選擇分離方法時，需要考慮肝臟組織的來源、肝細胞的數(shù)量和質(zhì)量、實驗?zāi)康牡纫蛩亍?
原代肝細胞是一種非常重要的體外細胞模型。原代肝細胞是從新鮮的肝臟組織中分離出來的，具有高度的生物學(xué)活性和功能性，可以用于許多不同的應(yīng)用，包括藥物代謝和毒性測試、肝細胞疾病研究、肝細胞移植等。原代肝細胞與其他肝細胞模型相比具有許多優(yōu)勢。原代肝細胞是從新鮮的肝臟組織中分離出來，具有更高的生物學(xué)活性和功能性，這意味著原代肝細胞可以更好地模擬人體肝臟的生理和代謝過程，因此更適合用于藥物代謝和毒性測試。這些細胞可以幫助研究人體對藥物的反應(yīng)，以及藥物對肝臟的影響。原代肝細胞可以用于研究肝細胞疾病，如肝病、肝硬化等。這些疾病對人類健康造成了極大的威脅，因此研究這些疾病的機制非常重要。原代肝細胞可以提供一個更真實的模型，幫助科學(xué)家更好地理解這些疾病的發(fā)生和發(fā)展過程。此外，原代肝細胞還可以用于肝細胞移植。肝細胞移植是一種克服肝臟疾病的方法，可以幫助患者恢復(fù)肝臟功能。原代肝細胞可以用于移植，以幫助患者恢復(fù)健康。原代肝細胞是一種非常重要的細胞類型，可以用于藥物代謝和毒性測試、肝細胞疾病研究、肝細胞移植等，為人類健康做出了重要的貢獻。原代肝細胞可以用于藥物代謝和毒性測試、肝細胞疾病研究、肝細胞移植等，為人類健康做出了重要的貢獻。
在進行原代肝細胞培養(yǎng)時，是否需要添加血清？在進行原代肝細胞培養(yǎng)時，通常需要添加血清。血清是一種含有多種營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子的液體，可以提供細胞生長所需的營養(yǎng)和生長因子，促進細胞的生長和增殖。血清中含有多種蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，可以為細胞提供能量和營養(yǎng)，促進細胞的生長和增殖。此外，血清中還含有多種生長因子，如胰島素、表皮生長因子等，可以促進肝細胞的分化和增殖。然而，血清中也含有一些雜質(zhì)和微生物，可能會對細胞的生長和功能產(chǎn)生不利影響。因此，在使用血清時，需要選擇高質(zhì)量的血清，并對血清進行嚴格的質(zhì)量控制和檢測，以確保血清的質(zhì)量和安全性。此外，在進行原代肝細胞培養(yǎng)時，也可以使用無血清培養(yǎng)基或低血清培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基或低血清培養(yǎng)基中不含有或含有較少的血清成分，可以減少血清對細胞的影響，提高細胞的純度和穩(wěn)定性。但是，無血清培養(yǎng)基或低血清培養(yǎng)基的成本較高，需要根據(jù)實驗?zāi)康暮徒?jīng)濟條件來選擇?？傊?，在進行原代肝細胞培養(yǎng)時，通常需要添加血清。在選擇血清時，需要選擇高質(zhì)量的血清，并對血清進行嚴格的質(zhì)量控制和檢測。此外，也可以選擇無血清培養(yǎng)基或低血清培養(yǎng)基，以減少血清對細胞的影響。原代肝細胞的研究可以幫助人們了解肝臟的功能和疾病，從而了解肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展，為其攻克提供可能。廣東人原代肝細胞
立沃生物的原代肝細胞可提供不同狀態(tài)的細胞，如貼壁細胞、懸浮細胞等，滿足客戶各種使用場景的個性化需求。廣州小鼠原代肝細胞懸浮
原代肝細胞比較常用的模型是二維模型。在膠原包被的培養(yǎng)板上，原代肝細胞可貼壁培養(yǎng)，同樣高密度培養(yǎng)有助于肝細胞分化狀態(tài)的維持。但原代肝細胞在體外的培養(yǎng)時間較短，人原代肝細胞在體外培養(yǎng)3天內(nèi)可保持乙肝病毒易感性，培養(yǎng)兩周發(fā)生明顯的去分化以及細胞凋亡情況。北京大學(xué)鄧宏魁教授發(fā)表在《科學(xué)》上的數(shù)據(jù)顯示，通過添加5種小分子化合物抑制原代肝細胞去分化進程，可在體外長期維持肝細胞的分化狀態(tài)，維持時間長達八周。那為什么原代肝細胞在體外容易去分化呢？肝細胞在體外缺乏了肝細胞與肝非實質(zhì)細胞的交流，又或者缺乏了肝臟的三維結(jié)構(gòu)。基于以上問題與分析，我在碩士期間開展了肝細胞與肝非實質(zhì)細胞的共培養(yǎng)工作。結(jié)果顯示，通過共培養(yǎng)，原代肝細胞可在體外長期培養(yǎng)，并在鋪板后的72天內(nèi)仍然保持了乙肝病毒的易感性，說明缺乏細胞間交流是原代肝細胞發(fā)生去分化的原因之一。到目前為止，原代肝細胞體外維持四個月的時間記錄仍然沒有被打破。 廣州小鼠原代肝細胞懸浮