原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是困擾學(xué)者們開展肝病研究的難題。為了研究肝臟的生理和病理過程，學(xué)者們一直在努力開發(fā)體外培養(yǎng)原代肝細(xì)胞的方法。 一般來說，原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)可以維持7-14天左右，7天以后細(xì)胞的狀態(tài)和活率會(huì)逐漸開始下降。 為了克服這些局限性，科學(xué)家們開始嘗試將肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞共同培養(yǎng)。根據(jù)鄧宏魁教授的5C文章，將肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞可以相互作用，形成更加復(fù)雜的細(xì)胞群體，從而更好地模擬肝臟的生理和病理過程，通過這種方法可以將原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)128天。 當(dāng)然，共同培養(yǎng)方法也存在一些局限性，比如如何控制細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、如何保持細(xì)胞的穩(wěn)定性等。但是，隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，相信這種方法將會(huì)越來越成熟，為研究肝臟生理和病理提供更加有效的手段。原代肝細(xì)胞能模擬肝臟對(duì)藥物的代謝和毒性反應(yīng)，是藥物的安全性評(píng)價(jià)和藥代動(dòng)力學(xué)研究的重要的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀|莞草魚原代肝細(xì)胞分離
細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）成分可以讓原代肝細(xì)胞在培養(yǎng)皿中貼壁效果更好。例如膠原蛋白、基質(zhì)膠或人纖維鏈接蛋白，這些成分可以模擬細(xì)胞在人體內(nèi)所處的微環(huán)境，從而提升細(xì)胞的狀態(tài)和生長(zhǎng)能力。 膠原蛋白是一種重要的細(xì)胞外基質(zhì)成分，它可以提供細(xì)胞所需的支撐和結(jié)構(gòu)。在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中，加入膠原蛋白可以讓原代肝細(xì)胞更好地附著在培養(yǎng)皿上，從而促進(jìn)原代肝細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。 基質(zhì)膠是一種含有多種細(xì)胞外基質(zhì)成分的復(fù)合物，它可以提供更加復(fù)雜和多樣化的細(xì)胞外環(huán)境。在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中，加入基質(zhì)膠可以模擬細(xì)胞在人體內(nèi)所處的復(fù)雜環(huán)境，從而提高細(xì)胞的適應(yīng)性和生長(zhǎng)能力。此外，基質(zhì)膠還可以促進(jìn)細(xì)胞間的相互作用和信號(hào)傳遞，從而增強(qiáng)原代肝細(xì)胞的功能和穩(wěn)定性。 人纖維鏈接蛋白是一種重組的細(xì)胞外基質(zhì)成分，它可以提供細(xì)胞所需的支撐和結(jié)構(gòu)。 加入細(xì)胞外基質(zhì)成分可以可以模擬細(xì)胞在人體內(nèi)所處的微環(huán)境，讓原代肝細(xì)胞在培養(yǎng)皿中更好地生長(zhǎng)和分化，從而提高細(xì)胞的狀態(tài)和穩(wěn)定性。浙江中國(guó)人原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)立沃生物原代肝細(xì)胞配套有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，對(duì)后續(xù)的細(xì)胞復(fù)蘇，培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)開展提供有力的技術(shù)保障。
原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中，根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長(zhǎng)的特性，可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)時(shí)可以呈單個(gè)細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團(tuán)，胞體為圓形。其優(yōu)點(diǎn)是在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)，生存空間大，允許長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)，便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細(xì)胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性，細(xì)胞相互接觸后可抑制細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，因此細(xì)胞不會(huì)相互重疊于其上面生長(zhǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)、匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，但只要營(yíng)養(yǎng)充分，仍可增殖分裂，但當(dāng)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到一定密度后，由于營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，細(xì)胞分裂停止，稱為密度抑制。 當(dāng)肝細(xì)胞被分離后，可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞在開始的4~6h內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性和體內(nèi)一致，隨時(shí)間的延長(zhǎng)而迅速下降，故懸浮肝細(xì)胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞有足夠的時(shí)間從損傷中恢復(fù)過來，保持了正常肝細(xì)胞的生物學(xué)特征及代謝活性，一般用于酶誘導(dǎo)研究、藥物細(xì)胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。
原代肝細(xì)胞比較常用的模型是二維模型。在膠原包被的培養(yǎng)板上，原代肝細(xì)胞可貼壁培養(yǎng)，同樣高密度培養(yǎng)有助于肝細(xì)胞分化狀態(tài)的維持。但原代肝細(xì)胞在體外的培養(yǎng)時(shí)間較短，人原代肝細(xì)胞在體外培養(yǎng)3天內(nèi)可保持乙肝病毒易感性，培養(yǎng)兩周發(fā)生明顯的去分化以及細(xì)胞凋亡情況。北京大學(xué)鄧宏魁教授發(fā)表在《科學(xué)》上的數(shù)據(jù)顯示，通過添加5種小分子化合物抑制原代肝細(xì)胞去分化進(jìn)程，可在體外長(zhǎng)期維持肝細(xì)胞的分化狀態(tài)，維持時(shí)間長(zhǎng)達(dá)八周。那為什么原代肝細(xì)胞在體外容易去分化呢？肝細(xì)胞在體外缺乏了肝細(xì)胞與肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的交流，又或者缺乏了肝臟的三維結(jié)構(gòu)。基于以上問題與分析，我在碩士期間開展了肝細(xì)胞與肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的共培養(yǎng)工作。結(jié)果顯示，通過共培養(yǎng)，原代肝細(xì)胞可在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，并在鋪板后的72天內(nèi)仍然保持了乙肝病毒的易感性，說明缺乏細(xì)胞間交流是原代肝細(xì)胞發(fā)生去分化的原因之一。到目前為止，原代肝細(xì)胞體外維持四個(gè)月的時(shí)間記錄仍然沒有被打破。 立沃生物的原代肝細(xì)胞提供多種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培訓(xùn)服務(wù)，包括細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培訓(xùn)、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)等。
原代肝細(xì)胞的來源供體來源很多。鑒于人原代肝細(xì)胞存在數(shù)量稀缺和倫理道德等問題,研究人員嘗試從動(dòng)物肝臟中分離原代肝細(xì)胞,用來體外培養(yǎng)并進(jìn)行研究。使用較多的是嚙齒動(dòng)物,還有一些哺乳動(dòng)物和魚類。目前常用的供體品系有樹鼩、大小鼠、豬、新西蘭兔、比格犬、貓、牛、羊、雞、鴨、鵝、魚等。 原代肝細(xì)胞除了供體品系不同以外，也會(huì)根據(jù)細(xì)胞來源的供體數(shù)，分為單供體和多供體。供體數(shù)的選擇主要取決于實(shí)驗(yàn)的研究目的。 原代肝細(xì)胞的應(yīng)用場(chǎng)景也很多。隨著技術(shù)水平的不斷提高，原代培養(yǎng)的動(dòng)物和人肝細(xì)胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究：①探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動(dòng)力學(xué)的研究；②預(yù)測(cè)和解釋藥物與藥物之間的相互作用；③研究藥物的細(xì)胞毒性等。懸浮肝細(xì)胞主要應(yīng)用于藥物代謝研究，一般使用多供體混合懸浮肝細(xì)胞，適用于試驗(yàn)周期比較短的實(shí)驗(yàn)。廣州豬原代肝細(xì)胞購(gòu)買
立沃生物的原代肝細(xì)胞可提供不同狀態(tài)的細(xì)胞，如貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等，滿足客戶各種使用場(chǎng)景的個(gè)性化需求。東莞草魚原代肝細(xì)胞分離
在新藥研發(fā)的過程中，原代肝細(xì)胞是不可或缺的體外模型，這是因?yàn)楦闻K能夠代謝大部分藥物。因此，通過使用原代肝細(xì)胞，可以更加準(zhǔn)確地模擬藥物在人體內(nèi)的代謝和毒理反應(yīng)，為新藥研發(fā)提供更加可靠的數(shù)據(jù)支持。 在藥物代謝實(shí)驗(yàn)中，原代肝細(xì)胞可以幫助研究人員了解藥物在體內(nèi)的代謝途徑、代謝產(chǎn)物以及代謝速率等信息。這些信息對(duì)于藥物的研發(fā)和臨床應(yīng)用都具有重要意義。同時(shí)，在藥物毒理實(shí)驗(yàn)中，原代肝細(xì)胞也能夠幫助研究人員評(píng)估藥物的毒性和安全性，為藥物的臨床應(yīng)用提供保障。 除此之外，原代肝細(xì)胞還可以用于藥物靶向誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。通過對(duì)原代肝細(xì)胞進(jìn)行特定的處理，可以使其表達(dá)特定的蛋白質(zhì)或基因，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物靶向的調(diào)控。這種方法可以幫助研究人員更好地了解藥物的作用機(jī)制，為藥物的研發(fā)和應(yīng)用提供更加可靠的指導(dǎo)。 原代肝細(xì)胞在新藥研發(fā)中具有不可替代的重要作用。利用原代肝細(xì)胞，可以更加準(zhǔn)確地模擬藥物在人體內(nèi)的代謝和毒理反應(yīng)，為藥物的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供更加可靠的數(shù)據(jù)支持。東莞草魚原代肝細(xì)胞分離