原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是困擾學(xué)者們開(kāi)展肝病研究的難題。為了研究肝臟的生理和病理過(guò)程，學(xué)者們一直在努力開(kāi)發(fā)體外培養(yǎng)原代肝細(xì)胞的方法。 一般來(lái)說(shuō)，原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)可以維持7-14天左右，7天以后細(xì)胞的狀態(tài)和活率會(huì)逐漸開(kāi)始下降。 為了克服這些局限性，科學(xué)家們開(kāi)始嘗試將肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞共同培養(yǎng)。根據(jù)鄧宏魁教授的5C文章，將肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞可以相互作用，形成更加復(fù)雜的細(xì)胞群體，從而更好地模擬肝臟的生理和病理過(guò)程，通過(guò)這種方法可以將原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)128天。 當(dāng)然，共同培養(yǎng)方法也存在一些局限性，比如如何控制細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、如何保持細(xì)胞的穩(wěn)定性等。但是，隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，相信這種方法將會(huì)越來(lái)越成熟，為研究肝臟生理和病理提供更加有效的手段。原代肝細(xì)胞冷凍復(fù)蘇后若用于懸浮培養(yǎng)，由于失巢凋亡一般壽命是12小時(shí)左右，而貼壁肝細(xì)胞可以存活達(dá)15天。浙江猴原代肝細(xì)胞圖片
保存溫度是影響原代肝細(xì)胞存活和功能的關(guān)鍵因素之一。一般來(lái)說(shuō)，原代肝細(xì)胞的保存溫度為4℃，但是在這種溫度下，細(xì)胞的代謝活動(dòng)仍然會(huì)繼續(xù)進(jìn)行，導(dǎo)致細(xì)胞的壽命有限。因此，為了延長(zhǎng)原代肝細(xì)胞的壽命，可以將其保存在低溫下，如-80℃或液氮中。這種保存方式可以有效地減緩細(xì)胞的代謝活動(dòng)，延長(zhǎng)細(xì)胞的壽命，但是在保存過(guò)程中需要注意加入凍存液，防止細(xì)胞凍結(jié)損傷。 原代肝細(xì)胞的運(yùn)輸也是一個(gè)重要的問(wèn)題。在運(yùn)輸過(guò)程中，細(xì)胞可能會(huì)受到振動(dòng)、溫度變化、氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的缺乏等不利因素的影響，導(dǎo)致細(xì)胞失活或功能受損。為了保證細(xì)胞的完整性和功能性，可以采用液氮運(yùn)輸?shù)姆绞?，即在低溫下運(yùn)輸細(xì)胞。在運(yùn)輸前給細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，也可以增強(qiáng)其抵抗不利因素的能力。江蘇草魚原代肝細(xì)胞鑒定立沃生物的原代肝細(xì)胞活力高，貼壁效果好，現(xiàn)貨供應(yīng)，周期短，可滿足基礎(chǔ)研究與藥物開(kāi)發(fā)的個(gè)性化需求。
原代肝細(xì)胞由于其敏感性和易受外界環(huán)境影響，細(xì)胞活率較低，成為制約其應(yīng)用的瓶頸之一。 適當(dāng)?shù)姆椒梢蕴岣咴渭?xì)胞培養(yǎng)活率。首先，選擇合適的動(dòng)物或人體來(lái)源是提高原代肝細(xì)胞細(xì)胞活率的關(guān)鍵。一般來(lái)說(shuō)，年齡較小、健康狀態(tài)良好的動(dòng)物或人體組織中的原代肝細(xì)胞活性較高，因此應(yīng)盡可能選擇這些來(lái)源。 其次，分離和培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)胞處理方法也會(huì)影響原代肝細(xì)胞的細(xì)胞活率。在分離過(guò)程中，應(yīng)盡可能減少機(jī)械或化學(xué)損傷，避免對(duì)細(xì)胞造成不可逆的傷害。在培養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)注意細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)環(huán)境，包括培養(yǎng)基的配方、溫度、濕度、氧氣濃度等因素，以保證細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和代謝。 此外，添加適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)因子和細(xì)胞因子也可以提高原代肝細(xì)胞的細(xì)胞活率。例如，添加肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、肝細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子等可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)，提高細(xì)胞的存活率。 綜上所述，提高原代肝細(xì)胞的細(xì)胞活率需要從多個(gè)方面入手，包括選擇合適的動(dòng)物或人體來(lái)源、優(yōu)化細(xì)胞處理方法、調(diào)節(jié)培養(yǎng)環(huán)境和添加適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)因子等。這些措施可以有效提高原代肝細(xì)胞的細(xì)胞活率，為其在肝臟生理和病理研究中的應(yīng)用提供了更好的條件。
原代肝細(xì)胞由于自身良好的體外重現(xiàn)性，以及保持了高度的酶水平，在藥物篩選中發(fā)揮著重要作用。原代肝細(xì)胞可以用于藥物代謝動(dòng)力學(xué)、藥物毒性評(píng)估和藥物相互作用研究等方面。原代肝細(xì)胞可以更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)藥物的代謝和毒性，因此在藥物研發(fā)領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用前景。 原代肝細(xì)胞還可以用于研究肝病的發(fā)病機(jī)制、診斷和therapeutic method。例如，可以利用原代肝細(xì)胞研究肝細(xì)胞cancer的發(fā)生機(jī)制，探索新的therapeutic method。此外，原代肝細(xì)胞還可以用于研究肝炎病毒的原理和therapeutic method，為肝炎的攻克提供新的思路和方法。 除了在藥物篩選和肝病研究中的應(yīng)用，原代肝細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)研究中也有著廣泛的應(yīng)用。例如，可以利用原代肝細(xì)胞研究肝細(xì)胞的分化和增殖機(jī)制，探索新的therapeutic method。此外，原代肝細(xì)胞還可以用于研究肝臟的生理和病理過(guò)程，為肝臟疾病的克服提供新的思路和方法。 原代肝細(xì)胞在藥物篩選、肝病研究和生物醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用前景。它們可以幫助科學(xué)家們更好地了解藥物的代謝和毒性、肝病的發(fā)病機(jī)制和therapeutic method、肝臟的生理和病理過(guò)程等方面，為人類健康事業(yè)做出重要的貢獻(xiàn)。原代肝細(xì)胞的研究可以幫助人們了解肝臟的功能和疾病，從而了解肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展，為其攻克提供可能。
貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞是酶誘導(dǎo)研究的重要模型，也是藥物代謝實(shí)驗(yàn)的重要模型。這種模型可以通過(guò)倍數(shù)變化方法來(lái)評(píng)估藥物是否為酶的誘導(dǎo)劑。具體來(lái)說(shuō)，研究人員可以使用已知的陽(yáng)性和陰性對(duì)照藥物來(lái)校準(zhǔn)體外系統(tǒng)，然后將研究藥物與細(xì)胞共孵育，測(cè)定孵育后CYP酶的mRNA表達(dá)水平倍數(shù)變化，以評(píng)估藥物是否為酶的誘導(dǎo)劑。這種方法可以幫助研究人員更好地了解藥物相互作用的機(jī)制，從而更好地指導(dǎo)臨床用藥。酶誘導(dǎo)是一種藥物相互作用的現(xiàn)象，指某些化合物能夠提高肝臟藥物代謝酶的活性，從而導(dǎo)致合用的藥物代謝速率加快，使得原藥的血藥濃度下降，進(jìn)而使其療效降低或喪失。這種現(xiàn)象在臨床上非常常見(jiàn)，因?yàn)樵S多藥物都需要通過(guò)肝臟代謝酶來(lái)進(jìn)行代謝，而酶誘導(dǎo)會(huì)影響這些代謝酶的活性，從而影響藥物的代謝。酶誘導(dǎo)的機(jī)制是通過(guò)影響肝臟細(xì)胞內(nèi)的CYP酶的表達(dá)和活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。CYP酶是肝臟細(xì)胞內(nèi)重要的藥物代謝酶之一，它能夠代謝許多藥物和毒物，從而使它們被代謝出體外。當(dāng)某些化合物進(jìn)入體內(nèi)后，它們會(huì)與CYP酶結(jié)合并使它們的特異性表達(dá)，從而使得CYP酶能夠更快地代謝藥物和毒物，使其被代謝出體外。原代肝細(xì)胞依舊是目前理想的體外模型，是藥物代謝研究的重要組成部分。肝原代細(xì)胞執(zhí)行著許多重要的功能,如毒物的分解、尿素的合成、制造血漿中的的大部分血漿蛋白質(zhì)等。江蘇草魚原代肝細(xì)胞鑒定
人原代肝細(xì)胞保留了細(xì)胞在體內(nèi)環(huán)境里的功能與特性，是較為接近臨床的一種標(biāo)準(zhǔn)體外短期實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)模型。浙江猴原代肝細(xì)胞圖片
原代肝細(xì)胞是藥物代謝研究領(lǐng)域非常重要的體外模型。原代肝細(xì)胞作為藥物代謝和藥物毒理研究的經(jīng)典模型，在探討藥物在肝中的代謝途徑和藥代動(dòng)力學(xué)的研究中發(fā)揮著重要作用。將苗頭化合物與懸浮原代肝細(xì)胞共孵育，不但可對(duì)化合物在肝細(xì)胞中的代謝穩(wěn)定性進(jìn)行研究，而且還可得到相對(duì)多量的高純度的代謝產(chǎn)物，在研究藥物生物轉(zhuǎn)化特征，尋找藥物可能的代謝物方面具有很大的優(yōu)勢(shì)。尤其是當(dāng)有證據(jù)顯示化合物的生物轉(zhuǎn)化途徑為二相代謝、水解作用或肝微粒體中非特異性蛋白結(jié)合很高、肝微粒體中代謝不明顯的時(shí)候，原代肝細(xì)胞更為不可替代的體外模型。浙江猴原代肝細(xì)胞圖片