cfDNA，cellfreeDNA，就是血液中游離的自身DNA，這些DNA多是從身體的細(xì)胞或者白血球破裂釋放出來的，基本上都是無害的，不用多久會被自身清理掉。不過值得一提的是，當(dāng)孕婦懷孕的時(shí)候，胎兒的DNA也會同時(shí)釋放到母親的血液里頭去，這是當(dāng)前火熱的無創(chuàng)唐氏篩查的基礎(chǔ)。通過抽取母親的外周血測序分析其中的游離DNA就可以判斷胎兒是否存在整個(gè)染色體或者大片段DNA的變異。有研究已經(jīng)證實(shí)，**患者外周血中的cfDNA總量，要高于健康人。通過這一點(diǎn)，雖然不能武斷的說cfDNA能成為**標(biāo)志物，但是cfDNA的含量增多，能起到一個(gè)較好的提示作用，作為一個(gè)初篩的手段。基于cfDNA的液態(tài)活檢中，盡管ctDNA在**診斷中的應(yīng)用是當(dāng)下cfDNA*****，研究**深入的分支。但是，cfDNA作為液態(tài)活檢，不只是局限于**學(xué)。例如，有研究報(bào)道對于接受***移植手術(shù)的病人，可以通過監(jiān)測術(shù)后外周血中具有捐獻(xiàn)者基因特征，片段化的cfDNA含量變化，來評估移植***的排斥情況。 提供樣本DNA完整性質(zhì)檢結(jié)果。遼寧技術(shù)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)豐富

熒光定量法（Methylight）

這種技術(shù)是在MSP技術(shù)上發(fā)展起來的，在MSP擴(kuò)增過程中利用熒光染料進(jìn)行定量。TaqMan? 探針法的應(yīng)用使得該技術(shù)具有更高的精確性。其原理與SNP檢測類似，針對亞硫酸氫鹽處理之后的DN**段，在甲基化位點(diǎn)上會存在單堿基的差異，根據(jù)這種差異進(jìn)行探針設(shè)計(jì)，隨后進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR，就能夠檢測甲基化的差異。這種方法**的優(yōu)勢在于其高敏感性和較高通量，且無需在PCR后電泳、雜交等操作，減少了污染和操作誤差。但是TaqMan? 探針訂購費(fèi)用較高，適用于少數(shù)位點(diǎn)大量樣本篩選。 陜西6mA技術(shù)服務(wù)方案WGBS用于人、哺乳動物及農(nóng)林牧漁方向的高水平甲基化研究。

發(fā)育基因的表觀突變是養(yǎng)殖歐洲鱸魚開始馴化的基礎(chǔ)

Epimutations in developmental

genes underlie the onset of domestication in farmed European sea bass. Mol Biol Evol. 2019 May 30 (IF= 14.797)

本研究通過RRBS測序，比較了早期馴化的

(n=12)與野生的(n=12)

歐洲鱸魚在馴化過程中DNA甲基化變化，發(fā)現(xiàn)早期馴化的鱸魚與野生的沒有遺傳差異，但在不同胚胎起源的組織中發(fā)生DNA甲基化變化。這些甲基化突變與經(jīng)過25年選擇性育種后的胞嘧啶至胸腺嘧啶多態(tài)性***重疊，表觀突變基因與正選擇基因一致。結(jié)果表明馴化初始階的表觀變異是一個(gè)重要事件。

    WGBS送樣要求一、送樣類型基因組DNA、細(xì)胞、全血、動植物組織、FFPE二、保存方式1、基因組DNA、細(xì)胞、全血、動植物組織：放-20℃冰箱中保存，或者放-80℃冰箱中長期保存(1年以內(nèi))；保存期間避免反復(fù)凍融。2、FFPE樣本：室溫保存三、運(yùn)輸條件1、基因組DNA：冰袋或者干冰運(yùn)輸；2、細(xì)胞、全血、組織樣本：干冰運(yùn)輸，順豐陸運(yùn)（3-4天時(shí)間），夏季10-15公斤干冰；秋冬季10公斤干冰；3、FFPE樣本：室溫運(yùn)輸。四、樣本量要求1、基因組DNA：常規(guī)WGBS，不少于2ug；微量WGBS，20ng1）提供樣本DNA完整性質(zhì)檢結(jié)果，例如瓊脂糖凝膠電泳或者Agilent2100電泳等；2）提取基因組DNA，要加RNA酶，去除RNA污染；3）提取基因組DNA，溶到TE或者elutionbuffer,避免溶解到純水；樣本體積不超過100ul;4）提供Qubit檢測濃度，基于OD值的檢測方法，例如NanoDrop,會嚴(yán)重高估濃度。2、細(xì)胞樣本：常規(guī)WGBS，不少于5x10*6個(gè)細(xì)胞；微量WGBS，5000個(gè)細(xì)胞1）收集貼壁或者懸浮細(xì)胞、使用預(yù)冷的1×PBS，洗滌2次，600g離心5分鐘；2）***一次離心后，盡量去除上清PBS，保留細(xì)胞沉淀;3、全血樣本：2-5ml外周血使用普通EDTA抗凝管，避免使用肝素抗凝管。4、動植物組織：動物組織，30mg以上;植物組織，不同組織。 焦磷酸測序技術(shù)是甲基化檢測新的金標(biāo)準(zhǔn)。

industryTemplate細(xì)胞、全血、組織樣本干冰運(yùn)輸。遼寧RRBS技術(shù)服務(wù)共同合作

6mA在細(xì)菌、藻類及動植物基因組中存在。遼寧技術(shù)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)豐富

    DNA甲基化修飾類型。5mc是表觀遺傳**重要的一種修飾，***存在于植物、動物等真核生物基因組中，被譽(yù)為“第五堿基”；5hmc是***發(fā)現(xiàn)的一種修飾堿基，成為哺乳動物的“第六堿基”；6mA在細(xì)菌、藻類及動植物基因組中存在。1992年，F(xiàn)rommeretal.將重亞硫酸鹽處理結(jié)合測序進(jìn)行DNA甲基化檢測。從此，BisulfiteSequencing（BS）成為金標(biāo)準(zhǔn)方案。其特點(diǎn)是：單堿基分辨率；結(jié)合測序。甲基化5mc檢測的金標(biāo)準(zhǔn)——BisulfiteSequencing。Wholegenomebisulfitesequencing,WGBS——DNA甲基化檢測**有力的工具。ImprovedReduceRepresentationBisulfiteSequencing,強(qiáng)化RRBS——高性價(jià)比DNA甲基化檢測方案。TargetedBisulfiteSequencing,高通量BSP——目標(biāo)位點(diǎn)/基因甲基化驗(yàn)證方案。 遼寧技術(shù)服務(wù)經(jīng)驗(yàn)豐富