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Compass血小板裂解液protocol

來源: 發(fā)布時間:2022-04-30

血小板裂解液(plateletlysate,PL)是自體或異體血小板富集物經(jīng)細胞裂解后的產(chǎn)物,已經(jīng)被諸多研究推薦作為胎牛血清(fetalbovineserum,F(xiàn)BS)的替代品,應用于間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells,MSC)的大規(guī)模擴增培養(yǎng)。但是,PL對諸如牙髓干細胞(dentalpulpstemcells,DPSCs)、牙周膜干細胞(periodontalligamentstemcells,PDLSCs)及根尖牙rutou干細胞(stemcellsfromapicalpapilla,SCAP)等牙源性干細胞的生物學效應尚不明確。人源血小板裂解液應用在多種來源的間充質(zhì)原代干細胞培養(yǎng)過程。Compass血小板裂解液protocol

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細胞培養(yǎng)基制備1.比較好在4°C下解凍ELAREMPrime血小板裂解液過夜或在37°C水浴中解凍1小時。2.通過將10%ELAREMPrime血小板裂解液添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基(即MEMα、GlutaMAX補充劑、無核苷)和1%的青霉素/鏈霉素作為**終濃度來制備完整的細胞培養(yǎng)基。3.應在完全細胞培養(yǎng)基中加入肝素以抗凝。我們建議添加肝素的**終濃度為2IU/mLPLSUPPLEMENT(貨號PL-SUP-500)or0.024mg/mLPLSUPPLEMENT-XF(貨號PL-SUP-500-XF).4.完整細胞培養(yǎng)基可在4°C下儲存,并穩(wěn)定約4周儲存和穩(wěn)定性ELAREMPrime在標簽上注明的失效日期之前是穩(wěn)定的。ELAREMPrime在使用前在-20°C(或在-80°C進行長期儲存)冷凍儲存時穩(wěn)定。解凍后,建議將未使用的ELAREMPrime樣品分裝并在-20°C下重新冷凍。應避免ELAREMPrime的重復凍融循環(huán),因為這會導不溶性顆粒形成的增加。使用時,只需預熱一份完整的細胞培養(yǎng)基,并將剩余的培養(yǎng)基冷藏在4-8°C。福建三一造血血小板裂解液肝素怎么加血小板裂解液中的沉淀在使用前需要過濾掉么?

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我們的PR過程旨在限制輻照對血小板裂解液性能的影響,并經(jīng)過驗證以提供有效性的客觀證據(jù)。許多常見的去除和滅活方法,如巴氏殺菌,納濾和溶劑/洗滌劑工藝去除或破壞產(chǎn)品功效所需的生長因子和蛋白質(zhì),或留下可能影響產(chǎn)品質(zhì)量的殘留物。電子束和γ射線輻照的作用機理與電離輻射對核酸的損傷機理相同,通常用于醫(yī)療和食品的輻照。我們的研究表明,伽馬射線照射可以有效的病毒滅活,但導致大量生長因子,不良產(chǎn)品的損失特征(渾濁)和總體減少細胞擴增的水平。其他步驟,如添加蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑通常用于對抗但這些效應,但需要額外的表征并會引入有關(guān)風險的新問題。

細胞zhiliao的生產(chǎn)是一項費時又昂貴的工程。優(yōu)化生產(chǎn)工藝通常會涉及優(yōu)化培養(yǎng)參數(shù)去減少時間、降低成本,同時提供呈現(xiàn)預期療效的表型。細胞增長所需的培養(yǎng)基補充劑也是整個細胞生產(chǎn)工藝中的一個較關(guān)鍵的因素。胎牛血清(FBS)一直以來被作為是細胞培養(yǎng)的常用補充劑,但因涉及倫理和安全問題,如今從加工過的血液中提取的人源培養(yǎng)基補充劑已經(jīng)得到越來越多的使用。血小板因其在血栓形成中的作用而聞名,很近,血小板被認為是傷口部位再生過程的關(guān)鍵介質(zhì)。血小板裂解過程中釋放的生長因子和細胞因子可調(diào)節(jié)局部免疫應答,并啟動局部組織的加速恢復(圖1)。考慮到血小板在人類生物學中這些作用,也就不難理解為什么處理過的血小板裂解液能夠給細胞培養(yǎng)基提供可靠的促生長特性了。血小板裂解液不能反復凍融,否則容易產(chǎn)生沉淀。

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本發(fā)明涉及細胞生物學領(lǐng)域,特別涉及一種血小板裂解液的制備方法及其應用,用于替代動物來源的血清,為間充質(zhì)干細胞擴增和生產(chǎn)提供的營養(yǎng)。該制備方法包括:將血小板在20~24℃振蕩保存1~5d,采用反復凍融法和超聲法進行處理,離心,收集上清液,去除纖維蛋白,獲得血小板裂解液.本發(fā)明提供的血小板裂解液的制備方法可明顯提高血小板裂解液中細胞因子含量,且可進行細胞因子的定量平衡,有利于減少產(chǎn)品批間的差異,可達到穩(wěn)定的促進人源性細胞生長的作用。血小板裂解液中的沉淀是怎樣形成的?Compass血小板裂解液protocol

GMP等級的血小板裂解液不含動物源成分的。Compass血小板裂解液protocol

ELAREMPrime血小板裂解液是一款基于人血小板的高性價比的細胞培養(yǎng)添加劑,為細胞提供了無動物源血清的培養(yǎng)環(huán)境,但是維持相同的細胞生長效果。ELAREMPrime血小板裂解液來源于輸血級的血小板,具有穩(wěn)定的貨源供應,而無需像FBS一樣依賴于屠宰行業(yè),確保了平穩(wěn)的價格和安全的細胞培養(yǎng)條件。ELAREMPrime生產(chǎn)于無菌條件下大量混合的血小板單位,批次和批次間的穩(wěn)定性保證了可重復的實驗數(shù)據(jù),無需像FBS一樣進行批次間實驗檢測。ELAREMPrime支持學術(shù)研究,工業(yè)生產(chǎn)以及體外診斷行業(yè)中的細胞體外擴增應用。其中的生長因子組分增強不同細胞類型和細胞系的繁殖和維持。Compass血小板裂解液protocol

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