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北京PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣

來源: 發(fā)布時間:2022-08-23

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。PEI轉(zhuǎn)染試劑使用的時候有什么注意事項?北京PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣

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接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。CHO細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑說明書有哪些品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑?

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線性化聚乙烯亞胺pei25,000,一種高電荷陽離子聚合物,非常容易結(jié)合于高電荷陰離子基質(zhì)。工業(yè)應(yīng)用上線性化pei可改善負電荷染料的物理外觀以調(diào)整染料的化學(xué)特性和增強染料與固相基質(zhì)的黏附能力,常用作黏附增強劑,作用同多聚賴氨酸(poly-lysine);科研應(yīng)用上;線性化pei能與dna或其他負電荷生物大分子簡單結(jié)合,正是這一特性,使得成為一種非常行之有效的載體運輸介質(zhì)(vector carrier),即轉(zhuǎn)染試劑。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內(nèi)客戶群體,生命科學(xué)領(lǐng)域一站式供應(yīng)鏈體系,以及高風(fēng)險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢.

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準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀什么原因?江蘇科研級PEI轉(zhuǎn)染試劑

PEI轉(zhuǎn)染試劑是不是可以保存在4度?北京PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣

線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復(fù)合物,并使該復(fù)合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導(dǎo)入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點:優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達質(zhì)粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞,轉(zhuǎn)染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。北京PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣

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