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細(xì)胞轉(zhuǎn)染PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝性價(jià)比超高

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-12-27

PEIMAX粉末配置方法:1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中;2)放入攪拌轉(zhuǎn)子,放置于磁力攪拌器上,設(shè)置攪拌程序以形成一個(gè)較小的漩渦;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分鐘左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1;5)如果不小心超過7.1,則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1;6)將溶液轉(zhuǎn)移到1L玻璃量筒中,加入水定容至1L;7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉(zhuǎn)染試劑溶液;8)按需分裝,4°C儲(chǔ)存(切記不可冷凍);注:未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中,并且保存在4℃的轉(zhuǎn)染試劑將可在6個(gè)月之內(nèi)保持性能。如jin用于蛋白定性研究,分裝的轉(zhuǎn)染試劑可延長(zhǎng)有效使用期至1年。如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!美國(guó)Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣?細(xì)胞轉(zhuǎn)染PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝性價(jià)比超高

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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,總體積如表1所示,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請(qǐng)自行確定檢測(cè)時(shí)間。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!液體PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝高回報(bào)的選擇PEI轉(zhuǎn)染試劑使用的時(shí)候有什么注意事項(xiàng)?

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材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲(chǔ)存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過濾,儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,過濾(0.2μm濾膜)后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆?。方法?.細(xì)胞分盤:通過胰酶消化收集細(xì)胞,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!?哪里有賣GMP等級(jí)的PEI轉(zhuǎn)染試劑?

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PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)勢(shì):高質(zhì)量的R&D和cGMP等級(jí)產(chǎn)品l高轉(zhuǎn)染效率,低細(xì)胞毒性;MAXgene符合cGMP標(biāo)準(zhǔn)和ISO13485質(zhì)量管理體系;經(jīng)過驗(yàn)證的生產(chǎn)工藝;全合成,無動(dòng)物源成分;高性價(jià)比,適用于從早期研發(fā)到臨床及商業(yè)化生產(chǎn)的各個(gè)階段l嚴(yán)格控制批間穩(wěn)定性;國(guó)內(nèi)外已有多個(gè)項(xiàng)目進(jìn)入臨床階段l具備殘留檢測(cè)方法。PEI MAX 是一款高度濃縮的粉劑,大量科學(xué)家選擇PEI MAX ,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑。多年以來,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評(píng)審的公開研究和出版文獻(xiàn)表明,在HEK293、CHO 和 Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強(qiáng)。PEI MAX是一種非GMP等級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑,適用于基礎(chǔ)科學(xué)研究及藥物研發(fā)早期階段。如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!有誰用過Polysciences的PEI轉(zhuǎn)染試劑?液體PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝高回報(bào)的選擇

PEI轉(zhuǎn)染試劑是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后,通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞轉(zhuǎn)染PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝性價(jià)比超高

接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑,歡迎咨詢上海曼博生物!細(xì)胞轉(zhuǎn)染PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝性價(jià)比超高

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