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核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

來源: 發(fā)布時間:2024-10-12

1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號Mine-bio,回復(fù)“PEI轉(zhuǎn)染試劑”即可領(lǐng)??!PEI轉(zhuǎn)染試劑是不含動物源成分的嗎?核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

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產(chǎn)品簡介Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉(zhuǎn)染試劑)溶液,由PEIMAX配置而成,采用0.1umPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物,這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞,并且Transporter5-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲(SF9、SF21)等真核細胞系,可作用于大到135,000個核苷酸的質(zhì)粒,所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染。Transporter5可節(jié)省試劑準備時間,加快項目進度。經(jīng)過嚴格的性能檢測,確保品質(zhì),在新藥研發(fā)過程中是一款快速、重復(fù)性好、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。江蘇PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣PEI轉(zhuǎn)染試劑的殘留檢測方法是什么?

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上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司始終致力于為客戶提供一站式生物醫(yī)藥科技服務(wù),以創(chuàng)新和為價值理念,通過自身研發(fā)團隊,以及與國內(nèi)外專業(yè)科研團隊強強聯(lián)合,不斷創(chuàng)新,為生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)提供產(chǎn)品和服務(wù)。生物醫(yī)學(xué)工程是綜合應(yīng)用生命科學(xué)與工程科學(xué)的原理和方法,從工程學(xué)角度在分子、細胞、組織、乃至整個人體系統(tǒng)多層次認識人體的結(jié)構(gòu)、功能和其他生命現(xiàn)象,研究用于防病、治病、人體功能輔助及衛(wèi)生保健的人工材料、制品、裝置和系統(tǒng)技術(shù)的總稱。近期還有PEIfree試用裝申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!關(guān)注曼博生物公眾號:Mine-bio,私信回復(fù)關(guān)鍵詞:PEI申請,即可參加試用裝申請活動。

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瞬時轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。如想申請試用裝,請關(guān)注公眾號:Mine-bio,回復(fù)“申請PEI”,即可參加!哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好?核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

用PEI轉(zhuǎn)染時,一般和DNA的比例是多少呢?核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

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