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廣州宿主細(xì)胞殘留DNA提取常見(jiàn)問(wèn)題

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-02-29

磁珠法核酸提取過(guò)程中的常見(jiàn)誤區(qū)--某一種磁珠好,就應(yīng)該在所有試劑配方中使用效果都好磁珠的種類(lèi)是多種多樣的,粒徑大小不同,分散性不同,磁響應(yīng)時(shí)間不同,包被基礎(chǔ)基質(zhì)不同,外層修飾官能團(tuán)不同,包被密度不同,官能團(tuán)臂長(zhǎng)不同,會(huì)導(dǎo)致磁珠特性千差萬(wàn)別。所以不同磁珠所適應(yīng)的實(shí)驗(yàn)和體系也是不同的。就像同樣是核酸提取的試劑,配方也并不完全相同,同樣應(yīng)用于核酸提取的磁珠,性質(zhì)也并非完全一致。有的磁珠在常量核酸提取中表現(xiàn)出了更高的吸附效率,有的磁珠更適用于微量核酸提取。有的磁珠適合偏酸性系列的試劑體系,有的磁珠適合偏堿性系列的試劑體系。有的磁珠磁響應(yīng)性好但是沉降速度快,更適合磁棒式自動(dòng)提取儀;有的磁珠沉降速度慢但是磁響應(yīng)時(shí)間長(zhǎng),更適合移液式自動(dòng)提取儀。很少有一種磁珠能適用于所有實(shí)驗(yàn)的情況,除了固定的試劑盒配合,多數(shù)情況下,磁珠和試劑體系都要做一定時(shí)間的配合調(diào)整。南京正揚(yáng)生物自主研發(fā)的核酸提取試劑有哪些?廣州宿主細(xì)胞殘留DNA提取常見(jiàn)問(wèn)題

磁珠是利用一定的組織包被中四氧化三鐵而形成的可以被磁鐵吸附,同時(shí)有能通過(guò)表面包被物吸附(結(jié)合)核酸的小珠子。小珠子的用途很大!它可以實(shí)現(xiàn)核酸提取的自動(dòng)化和高通量化,避免人工操作引起的差異及錯(cuò)誤,結(jié)果穩(wěn)定,重復(fù)性好。磁珠一般分為三層結(jié)構(gòu):內(nèi)層:為支持結(jié)構(gòu),如聚苯乙烯做的內(nèi)核;中間層:磁層,作用是與磁力架上的磁鐵相互吸附,從而分離核酸與反應(yīng)溶液,材料通常為Fe3O4;外層:修飾層,一般為帶負(fù)電的基團(tuán);深圳病毒核酸提取方法學(xué)支原體核酸提取試劑盒。

    南京正揚(yáng)生物的宿主細(xì)胞殘留核酸提取試劑盒手工操作步驟:1.向離心管(自備)中加入100μL樣本,做好標(biāo)記和記錄。2.加入25μL裂解液1,充分渦旋混勻25s后,瞬時(shí)離心?!嫦?0min。4.待樣本消化完畢后,瞬時(shí)離心,待用。5.加入200μL裂解液結(jié)合液,渦旋混勻10s,瞬時(shí)離心。6.加入30μL磁珠懸浮液以及100μL異丙醇,充分渦旋混勻5min,瞬時(shí)離心后待用。7.將離心管置于磁力架上至磁珠吸附完全,保持離心管固定于磁力架上,用移液器吸棄上清液,期間避免接觸磁珠。8.將離心管從磁力架上取下,加入400μL洗滌液A,充分渦旋混勻1min,瞬時(shí)離心后重新置于磁力架上磁性分離,待磁珠吸附完全后,保持離心管固定于磁力架上,用移液器吸棄上清液,期間避免接觸磁珠。9.將離心管從磁力架上取下,加入400μL洗滌液B,充分渦旋混勻1min,瞬時(shí)離心后重新置于磁力架上磁性分離,待磁珠吸附完全后,保持離心管固定于磁力架上,用移液器吸棄上清液,期間避免接觸磁珠。10.為保證液體充分移除,需將離心管再次短暫離心10s,重新置于磁力架上磁性分離,待磁珠完全分離后,用10μL移液器小心的將殘余液體吸棄干凈。11.從磁力架上取下離心管,打開(kāi)管蓋在室溫下干燥3min。

磁珠法核酸提取的原理是:磁珠結(jié)合液中含強(qiáng)有力的蛋白質(zhì)變性劑,能迅速溶解蛋白質(zhì),使核酸解離出來(lái);在其存在下,釋放出來(lái)的核酸成分可以結(jié)合在磁珠上;隨后通過(guò)磁珠洗滌液的作用,將蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽離子和許多有機(jī)雜質(zhì)去除。然后洗脫液將純凈的核酸洗脫下來(lái)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是通過(guò)磁珠吸附核酸,使得核酸從裂解后的細(xì)胞中分離出來(lái)。除了新    冠核酸快速檢測(cè)這種咽拭子樣本外,磁珠法還普遍適用于全血/血清/血漿、各類(lèi)拭子/刮片、干血斑、組織細(xì)胞、等其它標(biāo)本。它有操作簡(jiǎn)便、高效快速、安全、無(wú)毒、支持多種樣本類(lèi)型、適用于各型號(hào)提取儀器等特點(diǎn)。能夠在提取過(guò)程使得核酸高得率,減少核酸損失。宿主細(xì)胞核酸提取能用于支原體提取嗎?

磁珠法核酸提取的基本原理:核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細(xì)胞或組織在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被釋放出來(lái)。此時(shí)經(jīng)過(guò)表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進(jìn)行“特異性結(jié)合”,形成“核酸-磁珠復(fù)合物”。然后在外加磁場(chǎng)的作用下,復(fù)合物即分離出來(lái)。蕞經(jīng)過(guò)洗脫液洗去非特異性吸附的雜志、去鹽、純化后,即得到欲提取的核酸物質(zhì)。磁珠法核酸提取即可通過(guò)手工提取也可通過(guò)自動(dòng)化核酸提取平臺(tái)進(jìn)行提取。南京正揚(yáng)自主研發(fā)的核酸提取試劑盒的原理是什么?廣州宿主細(xì)胞殘留DNA提取常見(jiàn)問(wèn)題

核酸提取的方法有哪些?廣州宿主細(xì)胞殘留DNA提取常見(jiàn)問(wèn)題

如何評(píng)估磁珠法核酸提取產(chǎn)品的提取效果,可以從以下角度進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)品的性能評(píng)估:Purity(純度),具體而言就是磁珠提取后的核酸中含有多少非核酸類(lèi)的雜質(zhì)殘留,如蛋白、鹽、多糖等。該指標(biāo)通常用吸光度比值(A260/A280和A260/A230)來(lái)衡量。Quality(質(zhì)量),磁珠提取后的核酸尤其是較長(zhǎng)的基因組核酸應(yīng)保持其完整性,不應(yīng)出現(xiàn)斷裂或降解等現(xiàn)象。該指標(biāo)可通過(guò)簡(jiǎn)單的凝膠電泳或者復(fù)雜一些的特定PCR及微流控芯片(如AgilentBioanalyzer)進(jìn)行評(píng)估。Recovery(收率),磁珠提取過(guò)程應(yīng)當(dāng)盡量將所有的核酸都能從樣本中提取出來(lái)。高收率對(duì)于核酸檢測(cè)尤其是疾病早期檢測(cè)的靈敏度至關(guān)重要,在疾病早期,樣本中的病原體核酸含量通常較低,如果不能高效率地提取到所有核酸,那么很容易出現(xiàn)假陰性,導(dǎo)致漏檢。廣州宿主細(xì)胞殘留DNA提取常見(jiàn)問(wèn)題

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