EdU上的乙炔基能與生物素標記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點擊反應(yīng)，新合成的DNA會被相應(yīng)的生物素探針所標記，從而可以使用適當?shù)臋z測設(shè)備檢測到增殖的細胞。EdU檢測法中的點擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，終使細胞DNA標記上生物素等探針。上海EdU細胞增殖檢測試劑盒的價格是多少？提供EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

細胞增殖是評價細胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標。EdU細胞增殖檢測方法通過檢測滲入DNA復制期間的EdU，借助熒光檢測工具即可準確地檢測出新增殖的細胞，快速統(tǒng)計處于S期的細胞百分數(shù)，分析細胞增殖情況。該方法簡單、靈敏、快速、準確，適合各種細胞系的細胞增殖檢測，尤其適用于高通量篩選試驗，如在藥物篩選中檢測加藥后細胞增殖變化。EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細胞DNA復制活性，適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。上海品質(zhì)好的EdU細胞增殖檢測試劑盒原理使用EdU細胞增殖檢測試劑盒前的安全檢查。

EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，分子量很小，在動物體內(nèi)能夠迅速擴散到各種組織和中，并滲入正在復制的DNA分子，通過基于Apollo®熒光染料與EdU的特異性反應(yīng)即可簡單、快速、準確地檢測出細胞增殖情況。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法用量小得多，十分之一的用量即可獲得與BrdU檢測試劑盒相同甚至更好的檢測結(jié)果，而且小分子化學反應(yīng)檢測方法反應(yīng)快，效率高，反應(yīng)時間需幾分鐘，不需要DNA變性、蛋白酶處理、抗原抗體過夜孵育，能夠更好地保護細胞形態(tài)，更簡單、更靈敏、更快速、更準確。

細胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EdU后進行細胞涂片處理，固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。也可以應(yīng)用于流式細胞儀檢測。上海哪家EdU細胞增殖檢測試劑盒值得信賴？

通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光集團標記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性，廣泛應(yīng)用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復等方面的研究。EdU標記(a)將細胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數(shù)**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。EdU細胞增殖檢測試劑盒使用時的注意事項。安徽哪一家EdU細胞增殖檢測試劑盒廠家

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建議染色完成后立即進行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請于4°C條件下避光濕潤保存3天之內(nèi)完成拍照。若為細胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片劑進行封片后于4°C條件下保存及拍照檢測。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性，只需溫和的細胞固定化和透化處理，能夠較好地保護細胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細胞內(nèi)抗原識別位點，操作步驟更加快速、靈敏和準確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復制活性。提供EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

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