網(wǎng)站導(dǎo)航
大/小鼠腎缺血再灌注損傷（RIRI）模型_艾菱菲生物
一、背景
腎缺血再灌注損傷（RIRI）是急性腎損傷（Acute Kidney Injury, AKI）的主要病理機(jī)制之一，常見(jiàn)于腎移植、休克、創(chuàng)傷或心臟手術(shù)等臨床場(chǎng)景。缺血期導(dǎo)致腎組織缺氧和能量代謝障礙，再灌注后活性氧（ROS）爆發(fā)、炎癥反應(yīng)加劇及細(xì)胞凋亡***，進(jìn)一步加重腎損傷。研究RIRI的分子機(jī)制及干預(yù)措施對(duì)改善臨床預(yù)后具有重要意義。
二、造模方法
- 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇品系：SD大鼠、Wistar大鼠或C57BL/6小鼠（品系差異可能影響損傷程度）。
- 性別與體重：通常選用雄性，大鼠體重200-250 g，小鼠20-25 g。
- 適應(yīng)性飼養(yǎng)：標(biāo)準(zhǔn)SPF環(huán)境，自由飲食飲水，術(shù)前禁食12小時(shí)（不禁水）。
手術(shù)造模流程大鼠RIRI模型步驟：
- 保定麻醉開(kāi)腹手術(shù)：腹中線切口暴露雙側(cè)腎蒂（血管、輸尿管及神經(jīng)束）。
- 缺血誘導(dǎo)：用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾（如Bulldog夾）夾閉單側(cè)或雙側(cè)腎蒂。①單側(cè)夾閉：需對(duì)側(cè)腎切除（用于腎功能評(píng)價(jià)）。②雙側(cè)夾閉：直接模擬雙腎缺血（需嚴(yán)格控制缺血時(shí)間以防高死亡率）。
- 再灌注：移除動(dòng)脈夾恢復(fù)血流，肉眼觀察腎臟顏色由暗紅轉(zhuǎn)為鮮紅。
- 縫合：逐層縫合肌肉層和皮膚，術(shù)后保溫并注射鎮(zhèn)痛藥物（如布托啡諾）。
關(guān)鍵參數(shù)：
- 缺血時(shí)間：30-45分鐘（依研究目的調(diào)整，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易致不可逆損傷）。
- 再灌注時(shí)間：24-48小時(shí)為常見(jiàn)觀察窗口。
小鼠RIRI模型
- 麻醉與切口：麻醉，腹側(cè)切口約1 cm。
- 腎蒂暴露：用棉簽輕推腸管，暴露腎蒂后以微血管夾（如Fine Science Tools夾）夾閉。
- 缺血與再灌注：缺血時(shí)間通常縮短至20-30分鐘（因小鼠代謝快，耐受力低于大鼠）。
- 注意事項(xiàng)：術(shù)中維持體溫（37℃）以防低溫加重?fù)p傷。假手術(shù)組*開(kāi)腹不夾閉腎蒂。
三、檢測(cè)與評(píng)價(jià)腎功能評(píng)估
血清生化指標(biāo)：
血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）：通過(guò)尾靜脈或心臟**，酶法或比色法檢測(cè)，升高提示腎小球?yàn)V過(guò)功能受損。
尿液分析：尿蛋白（UPRO）和尿NAG酶（腎小管損傷標(biāo)志物）。
（二）組織病理學(xué)分析
HE染色：觀察腎小管上皮細(xì)胞空泡化、刷狀緣脫落、管型形成及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
損傷評(píng)分：根據(jù)腎小管壞死程度分為0-4級(jí)（0：無(wú)損傷；4：>50%壞死）。PAS染色：評(píng)估腎小球基底膜完整性。
（三）氧化應(yīng)激與炎癥指標(biāo)氧化損傷：
MDA（丙二醛）：脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，硫代巴比妥酸法檢測(cè)。
SOD（超氧化物歧化酶）和GSH（谷胱甘肽）：抗氧化能力指標(biāo)。炎癥因子：ELISA檢測(cè)血清或腎組織TNF-α、IL-6、IL-1β水平。
（四）細(xì)胞凋亡檢測(cè)TUNEL染色：標(biāo)記凋亡細(xì)胞核，計(jì)算凋亡率。Western blot：檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白（如Bax、Bcl-2、Caspase-3）。
（五）分子機(jī)制研究NF-κB、MAPK信號(hào)通路：蛋白表達(dá)與磷酸化水平分析。自噬相關(guān)蛋白（LC3-II/LC3-I、p62）：評(píng)估自噬在RIRI中的作用。
四、結(jié)論
RIRI大鼠和小鼠模型是研究急性腎損傷機(jī)制及干預(yù)策略的有效工具，結(jié)合多維度評(píng)價(jià)體系可***解析病理生理過(guò)程。未來(lái)需進(jìn)一步開(kāi)發(fā)無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)技術(shù)（如生物發(fā)光成像）并探索跨物種轉(zhuǎn)化研究。以上內(nèi)容可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整參數(shù)和方法細(xì)節(jié)。
公司信息
我要咨詢
每日熱詞
