單個(gè)核細(xì)胞分離步驟：Ficoll試劑混勻：首先將Ficoll試劑瓶顛倒多次混勻，使用注射器法吸取Ficoll分離液（去掉聚丙烯蓋，插入注射器針頭）或吸管法吸取Ficoll分離液（去掉聚丙烯蓋，拉起鋁環(huán)，拉開金屬密封，移除銀環(huán)。拿掉橡膠密封，無菌操作吸取需要的Ficoll分離液）。1.離心管加入3mLFicoll分離液。2.稀釋過的血液樣本小心鋪到Ficoll分離液上面。注：緩慢加入樣本，小心不要和Ficoll分離液混合，勿攪動(dòng)。1.室溫條件，水平轉(zhuǎn)子離心400g，離心30-40min，可見細(xì)胞分層。2.用無菌吸管吸掉上層血漿和血小板，不要碰到單個(gè)核細(xì)胞層。3.無菌吸管轉(zhuǎn)移單個(gè)核細(xì)胞層到無菌離心管?？蒲袑?shí)驗(yàn)中試劑取用應(yīng)注意事項(xiàng)：滴瓶上的滴管不能用水沖洗，也不能交叉使用。PB磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L,pH7.2-7.4)
如何降低檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)的誤差概率？檢驗(yàn)技師。應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。使用校對(duì)過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要。仔細(xì)閱讀說明書。嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。檢測(cè)試劑盒不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。洗滌干凈。洗板不干凈，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。western轉(zhuǎn)移緩沖液(尼龍膜)液體試劑給藥途徑多，可以內(nèi)服，外用。
檢測(cè)試劑盒變質(zhì)的原因：樣本因素。標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。操作因素。標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一，但不能反映試劑質(zhì)量的全部。試劑成份、純度、用量及穩(wěn)定性，才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。目前市售的一些試劑具有抗干擾作用，主要是通過加入抗干擾物質(zhì)或使用新的色素原以避免內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。但值得注意的是：一些試驗(yàn)項(xiàng)目在消除內(nèi)源性物質(zhì)干擾的同時(shí)，會(huì)帶來樣品含量真實(shí)性的變化。 線性范圍變窄 現(xiàn)象：高值測(cè)不高。原因：生產(chǎn)試劑時(shí)有效成分投料量不足;試劑成份穩(wěn)定性較差。靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反應(yīng)速度曲線斜率下降，測(cè)定結(jié)果有嚴(yán)重系統(tǒng)誤差。原因：試劑底物濃度不足。外用液體試劑系指藥物與適宜的溶劑或分散介質(zhì)制成的。
當(dāng)往某些溶液中加入一定量的酸和堿時(shí)，有阻礙溶液pH變化的作用，稱為緩沖作用，這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液(如HOAc與NaOAc)，弱堿及其鹽的混合溶液(如NH3·H2O與NH4Cl)等都是緩沖溶液。由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對(duì)酸的緩沖作用，是由于溶液中存在足夠量的堿A-的緣故。當(dāng)向這種溶液中加入一定量的強(qiáng)酸時(shí)，H+離子基本上被A-離子消耗:所以溶液的pH值幾乎不變;當(dāng)加入一定量強(qiáng)堿時(shí)，溶液中存在的弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH的變化。檢測(cè)試劑盒要留心避免出現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。甘油明膠封固液
液體試劑是指藥物分散在液體分散介質(zhì)中組成的內(nèi)服或外用的液態(tài)制劑。PB磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L,pH7.2-7.4)
檢測(cè)試劑盒正確保存與操作辦法？檢測(cè)試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶分出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響成果。各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校正其準(zhǔn)確性，以防止試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，引薦運(yùn)用排加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的一起做規(guī)范曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于規(guī)范品孔*孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋必定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，核算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。PB磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L,pH7.2-7.4)