穩(wěn)定轉染細胞的篩選：1、轉染48 h后，用含適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時的殺傷效果較好。但細胞過于稠密，其效率會降低，較好將細胞稀釋至豐度低于25%。2、每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。3、篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間（取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果）。4、挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。5、后續(xù)更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。殺滅曲線的建立：按照每2天進行活細胞計數(shù)，來確定殺滅未轉染細胞的恰當濃度。BES緩沖液(1mol/L,pH7.2)

緩沖溶液的計算分為兩大類：（1）已知共軛酸堿的濃度或質量，計算pH值。（2）已知pH值，計算配制時要滿足的濃度和質量配制緩沖溶液時，有多種組合的方法，常見的有以下幾種（1）兩種溶液混合：如，NH3+NH4Cl溶液，NaOH溶液 +NH4Cl溶液，NH3+HCl溶液。（2）固體試劑+溶液：如，NH3+NH4Cl固體，NaOH固體 +NH4Cl溶液，HAc+NaAc固體。（3）兩種固體試劑溶解混合：如，NaOH固體 +NH4Cl固體，Na2CO3固體+NaHCO3固體。由此可見，緩沖溶液的計算類型是很豐富的。實驗中的配制一般是按共軛酸堿的量來稱取或量取試劑后，再溶解混合到指定體積。但分析化學學習中的計算類型則可以演繹出十幾種計算情況。標準蛋白質溶液(BSA,1mg/ml)BMC原代分離步驟：較上面是血漿，血漿層和淋巴細胞分離液之間是淋巴細胞層呈白膜狀。

方便快捷的LSMTM淋巴細胞分離液：早期分離白細胞的方法，會用一種化合物混合血液。此化合物能夠聚集紅細胞，只輕微影響白細胞。通過離心，紅細胞由于密度增加而聚集沉淀，同時從離心管內(nèi)上層收集白細胞。后來，B?yum提出的以Ficoll?-甲泛影鈉溶液為介質進行離心。稀釋的血液在Ficoll?-甲泛影鈉溶液中分層，之后低速短時離心。紅細胞和多形核粒細胞沉降到管底，單個淋巴細胞、單核細胞和血小板可以從兩個分層間的分界面處收集。而MP Biomedicals出品的淋巴細胞分離液，不同于B?yum的配方，由于LSM中含有聚蔗糖和泛影酸鹽，能夠形成特定的密度梯度1.077 g/mL（20℃）。只需要將血液樣品輕置于淋巴細胞分離液上層，經(jīng)過簡單的一步離心(400 xg，30分鐘)，就能夠分離獲得淋巴細胞。

丁胺卡那霉素功能與主治：①本品適用于綠膿桿菌及其他假單胞菌屬、大腸桿菌、變形桿菌（吲哚陽性和吲哚陰性）、普魯威登菌、克雷伯菌、腸桿菌、沙雷菌屬、不動桿菌屬與葡萄球菌屬等所致的菌血癥、細菌性心內(nèi)膜炎、敗血癥（包括新生兒膿毒癥）、呼吸道傳染、骨關節(jié)傳染、神經(jīng)系統(tǒng)傳染（包括腦膜炎）、皮膚軟組織傳染、膽道傳染、腹腔傳染（包括腹膜炎）、燒傷、手術后傳染（包括血管外科手術后傳染）及復發(fā)性尿路傳染等。②阿米卡星不宜用于單純性尿路傳染初治病例，除非致病菌對其他毒性較低的克菌藥均不敏感。③阿米卡星對大部分氨基糖苷類純化酶穩(wěn)定，故適用于治好革蘭陰性桿菌中卡那霉素、慶大霉素或妥布霉素耐藥菌株，尤其如普魯威登菌屬、粘質沙雷菌和綠膿桿菌所致傳染。固體試劑的取用:藥匙每取完一種試劑后都必須用干凈的紙擦拭干凈。

鹽酸金霉素溶液(Chlortetracycline,5mg/ml) 簡介： 金 霉 素 (Chlortetracycline) 又 稱 氯 四 環(huán) 素 ， 是 Benjamin Dugga 從 Streptomyces aureofaciens 金色鏈霉菌(Streptomyces aureofaciens) 分離出來的一種四環(huán)素類。 CAS 號為 57-，分子量為 478.88。金霉素抑菌原理在于與 tRNA 競爭性結合，從而克制蛋 白質合成。臨床上，金霉素可以用于革蘭陽性菌如金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌的傳染 以及沙眼的治好 組成： 編號 名稱 CA0105 Storage Chlortetracycline solution(5mg/ml) 使用說明書 10ml -20℃ 避光 1份 操作步驟(光供參考)： 1、 根據(jù)實驗具體要求操作。 2、 一般工作濃度為 10～50μ g/ml。 注意事項： 1、 注意無菌操作，避免污染。 2、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。丁胺卡那霉素給藥說明：患者應給予足夠的水分，以減少腎小管損害。BES緩沖液(1mol/L,pH7.2)

pH緩沖溶液有何用途：用以檢定pH計的準確性。BES緩沖液(1mol/L,pH7.2)

注意事項：1.全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得較佳的實驗結果，較好在取樣 2h內(nèi)進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h后分離效果更差甚至不能達到分離目的。2.本實驗較好不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面，影響細胞分離效果。3.吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒 細胞數(shù)量增加。4.分離液用量大于組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳。BES緩沖液(1mol/L,pH7.2)