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來源: 發(fā)布時間:2025-04-26

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***做實驗需要用正常的細胞摸索合適的細胞密度和培養(yǎng)時間,確定之后再加實驗組,同時如果條件允許,設置一組已知高遷移性的細胞作陽性對照。注意細胞小室內外培養(yǎng)基的比例,不要使小室外培養(yǎng)基超過小室內培養(yǎng)基液面。觀察細胞時一定要擦去小室內部貼在膜上的細胞。 默克提供的相關產品: Millicell?細胞培養(yǎng)小室:PET膜懸掛式或PCF膜站立式,膜孔徑為5 μM或8 μM 藥物跨內皮細胞滲透性實驗 實驗目的: 研究某種藥物分子穿透內皮細胞的滲透率

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取上述200μL細胞液加入小室,下室(培養(yǎng)板)加入900L含有10% FBS的培養(yǎng)基。不同規(guī)格的小室和培養(yǎng)板所加的體積不同,具體參考Millicell?產品說明書。37°C孵育24至72小時,依據**細胞類型而定。孵育結束,小心取出細胞小室,吸掉小室上層培養(yǎng)液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min,0.5%結晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色20min,然后進行第8步或者第9步。PBS清洗兩次以去除多余的染料,立即用棉簽擦去濾膜上層的細胞,自然靜置風干。顯微鏡下觀察濾膜下層的細胞,隨機選取不同的視野計數并算平均值。結晶紫溶解濾膜下層細胞,然后用33%醋酸脫色,將結晶紫完全洗脫下來,洗脫液可在酶標儀上570nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細胞穿透不均勻帶來的誤差。買細胞檢測試劑盒就找益啟生物。上海培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)

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