免疫組化實驗流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結免疫組化詳細步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。

6）滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來水充分沖洗。

13）可進行復染，脫水，透明。

14）選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?做免疫組化的目的是什么？浙江小鼠免疫組化價格

免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。

（3）內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色； 

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（4）非特異性組分與抗體結合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果； 

（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等； 

（6）適當增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要； 

（7）防止標本染色過程中出現(xiàn)干片，這容易增強非特異性著色。 云南靠譜免疫組化注意事項免疫組化技術的原理、分類和優(yōu)點！

免疫組化的特點：

1）特異性強。免疫學的基本原理決定抗原與抗體之間的結合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時，才會出現(xiàn)交叉反應。

2）敏感性高。在應用免疫組化的起始階段，由于技術上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結合，這樣高敏感性的抗體抗原反應，使免疫組化方法越來越方便地應用于常規(guī)病理診斷工作。

3）定位準確、形態(tài)與功能相結合。該技術通過抗原抗體反應及呈色反應，可在組織和細胞中進行抗原的準確定位，因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，這樣就可以進行形態(tài)與功能相結合的研究，對病理學領域開展深入研究是十分有意義的。

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免疫組化在什么情況下進行組織抗原修復，抗原修復的條件是什么？ 

（1）由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中，發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用，從而失去抗原性。通過抗原修復，使得細胞內(nèi)抗原決定族重新暴露，提高抗原檢測率。

（2）修復方法從強到弱一般分為三種，高壓修復、微波修復、胰酶修復。修復液也分為若干種（具體的可以查閱相關資料，大量的：中性的、高pH的等）。

（3）微波修復，我們一般用6min*4次，效果不錯。

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免疫組化結果要如何分析？

 （1）陽性著色細胞計數(shù)法。在40*光鏡下，隨機選擇不重疊的10個視野，機器或人工計數(shù)陽性著色細胞，每組3~6張不同動物組織切片，然后進行組間比較即可。

（2）灰密度分析法?？梢酝ㄟ^在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進行灰密度分析，然后進行統(tǒng)計分析即可。

（3）評分法。用光學顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進行評分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**終可以分數(shù)相加，再進行比較。對于以上這幾種方法，各有利弊，請細心選擇。要想得到正確結果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。

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臨床應用中，藥物靶點免疫組化，英瀚斯生物專業(yè)做實驗外包服務，一站式醫(yī)學科研平臺。免疫組化及分子病理學方法在疾病診斷中只只起輔助醫(yī)療的作用，而藥物病理學是用病理學的方法確定藥物醫(yī)療的靶點、評價藥物醫(yī)療的療效、預測藥物醫(yī)療的反應，因此藥物靶點免疫組化屬“單獨的診斷”。因此對于對照的設置、質(zhì)量的控制均需要更高的要求，如對試劑的要求，不同于一般的診斷試劑，應按對藥物管理的要求操作。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫(yī)生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫(yī)療的依據(jù)。浙江小鼠免疫組化價格