HE染色反藍(lán)的原理:蘇木素染液,細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。 分化:蘇木素染色之后,用水洗去未結(jié)合在細(xì)胞上的染液,但是在細(xì)胞核中結(jié)合過(guò)多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去,才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明,把這個(gè)過(guò)程稱為染色的分化作用。因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),使色素與組織解離,分化不可過(guò)度。藍(lán)化:分化之后蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),而呈藍(lán)色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木精染上的細(xì)胞核變呈藍(lán)色,稱藍(lán)化作用,一般多用自來(lái)水浸洗即可變藍(lán),也可用溫水(50度溫水比較好)變藍(lán)。HE染色取材、染色以及分析方法介紹。吉林值得信賴的HE染色
HE染色法,。蘇木精染液為堿 ,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色 ;伊紅為酸染料 ,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。而線粒體用HE染色不可見(jiàn),活細(xì)胞通常要求活細(xì)胞近似無(wú)色線粒體需要用健那綠來(lái)染色,再在高倍鏡下觀察。從人或動(dòng)物新鮮尸體上取下塊(一般厚度不超過(guò)0.5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變凝固,以防止細(xì)胞后的自溶或細(xì)菌的分解,從而保持細(xì)胞本來(lái)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去塊中的水份。再將塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出塊的中酒精,才能浸蠟包埋。吉林值得信賴的HE染色HE染色 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。
HE染色等常規(guī)染色,組化或是熒光優(yōu)先推薦做石蠟切片。原因:石蠟切片對(duì)組織的形態(tài)保存比冰凍切片好,并且對(duì)抗原基本無(wú)影響。脂質(zhì)染色(油紅O染**odipy染色,尼羅紅染色)必須做冰凍切片,不能做石蠟切片。以下染色必須要新鮮或冷凍組織冰凍切片:ROS染**-半乳糖甘酶染色,ATP染色,膽固醇染色。如果標(biāo)本已經(jīng)放在-80°冰箱冷凍了之后又想要做石蠟切片,將標(biāo)本取出來(lái)千萬(wàn)不要解凍直接放于固定液內(nèi)固定(在固定液內(nèi)邊解凍邊固定)。組織形態(tài)結(jié)構(gòu)保存完好順序:新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>組織-80°冷凍后投入固定液內(nèi)固定石蠟切片>新鮮組織立即投入固定液內(nèi)固定冰凍切片>組織-80°冷凍后直接冰凍切片。
HE染色注意事項(xiàng):1、染色時(shí)調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(zhǎng),組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此,要在自來(lái)水中沖洗時(shí)間長(zhǎng)一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時(shí)胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染蘇木精后,分色這一步是關(guān)鍵,應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行,一般以細(xì)胞核染色清楚(晰)而細(xì)胞質(zhì)基本無(wú)色為佳。如果過(guò)分延長(zhǎng)分色時(shí)間將導(dǎo)致染色太淺,應(yīng)重新染色后再行分色。3、切片經(jīng)酒精脫水后,入二甲苯時(shí)可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),此為脫水不徹底,應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精,更換酒精、二甲苯,以求徹底脫水與透明。4、在染色過(guò)程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經(jīng)元形態(tài)。5、切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前,切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。6、***封固時(shí),要用中性樹(shù)脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會(huì)褪色,所用樹(shù)脂濃度要適當(dāng),樹(shù)脂封固時(shí)不能有氣泡。專業(yè)的HE染色服務(wù)平臺(tái),南京英瀚斯生物。
HE染色細(xì)胞核灰藍(lán)原因:(1)組織處理溫度過(guò)高、過(guò)熱,在石蠟停留的時(shí)間過(guò)長(zhǎng);(2)固定時(shí)間太短,接下來(lái)就直接在高濃度的乙醇中行脫水處理。對(duì)策:理論上來(lái)說(shuō),加熱處理*在組織浸蠟步驟才使用,組織不能在熱的蠟液中停留過(guò)長(zhǎng)時(shí)間。如果由于某些原因不能進(jìn)行下步包埋處理,完成浸蠟處理后的組織,可將組織連同塑料包埋盒一并放置在室溫空氣中,冷卻凝固,以備包埋。待需要包埋時(shí)再重新加溫直至石蠟融化即可。組織在處理前必須確保固定良好,脫水比較好能從低濃度的乙醇開(kāi)始。HE染色,一站式實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)平臺(tái)。內(nèi)蒙古靠譜的HE染色
HE染色小貼士以及相關(guān)技巧分析。吉林值得信賴的HE染色
HE染色全名為蘇木精和伊紅染色方法,是**基本的病理學(xué)染色技術(shù)。由于組織或細(xì)胞的不同成分對(duì)蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后,細(xì)胞核及鈣鹽粘液等呈藍(lán)色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍(lán),如處理適宜,可使細(xì)胞核著清楚的深藍(lán)色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細(xì)胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)均可顯示出來(lái)。質(zhì)量好的HE具備條件1.細(xì)胞核與細(xì)胞漿藍(lán)紅相映,鮮艷亮麗;2.胞核鮮明、核膜、核染色質(zhì)顆粒均清晰可見(jiàn);3.組織或一般結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及假物質(zhì)成分均能顯示出來(lái)。吉林值得信賴的HE染色