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單分子級(jí)別數(shù)字ELISA微量試劑

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2025-05-29

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芯棄疾JX-8B數(shù)字化高靈敏ELISA芯片檢測(cè)產(chǎn)品應(yīng)用場(chǎng)景:適合生物實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室、科研市場(chǎng)、產(chǎn)品預(yù)研、產(chǎn)品開(kāi)發(fā)、ELISA檢測(cè)、動(dòng)物疫病檢測(cè)等各種應(yīng)用場(chǎng)景應(yīng)用范圍:各種高靈敏多重免疫檢測(cè),可替代各種ELISA試劑盒,及其他免疫檢測(cè)產(chǎn)品。

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是目前新型型的單分子檢測(cè)方法的低成本版、普及版!每個(gè)生物/醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測(cè)??!使用現(xiàn)有平臺(tái)就能做的單分子免疫檢測(cè)?。【哂幸韵绿攸c(diǎn):多重、超敏、微量、極速、靈活、開(kāi)放 每個(gè)生物/醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測(cè);單分子級(jí)別數(shù)字ELISA微量試劑

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每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測(cè)

動(dòng)力學(xué)上,對(duì)于200,000個(gè)微球分散在100μL中,珠子之間的平均距離約為80μm。大小為TNF-α和PSA(分別為17.3和30kDa)的蛋白質(zhì)將在不到1min的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)散80μm。表明,在2小時(shí)的孵育過(guò)程中,蛋白質(zhì)分子的捕獲不會(huì)受到限制動(dòng)力學(xué)上。其次,必須有足夠的珠子被加載到陣列上以限制泊松噪聲。200,000個(gè)珠子加載到50,000孔陣列中,通常會(huì)導(dǎo)致20,000–30,000個(gè)微球被困在1mL孔中。對(duì)于典型的背景信號(hào)為1%活性微球(見(jiàn)下文),這種裝載導(dǎo)致背景信號(hào)為200-300個(gè)活性微球檢測(cè)到,對(duì)應(yīng)于泊松噪聲的可接受變異系數(shù)(CV)為6-7%。第三,過(guò)高的微球濃度可能導(dǎo)致:a)非特異性結(jié)合增加,降低信噪比;以及b)分析物與微球的比例過(guò)低,導(dǎo)致活性微球的比例過(guò)低,從而導(dǎo)致泊松噪聲引起的高CV。這些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人第5頁(yè)因素意味著每100μLoftest樣品含有20萬(wàn)到100萬(wàn)顆珠子是比較好的數(shù)字ELISA。同時(shí),為了獲得可接受的背景信號(hào)(1%)和泊松噪聲)。 單分子級(jí)別數(shù)字ELISA微量試劑芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測(cè)產(chǎn)品,低成本單分子檢測(cè);

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我們已經(jīng)開(kāi)發(fā)了兩種臨床相關(guān)蛋白的檢測(cè)方法——前列腺特異性抗原(PSA)和腫瘤壞死因子α(TNF-α),以確定高酶標(biāo)記物單體提供的靈敏度轉(zhuǎn)化為高靈敏度的檢測(cè)方法血液中的蛋白質(zhì)。兩種蛋白質(zhì)的數(shù)字ELISA如圖1所示。開(kāi)發(fā)這些試驗(yàn)的關(guān)鍵參數(shù)是:珠子濃度和兩種標(biāo)記試劑(檢測(cè)試劑和酶偶聯(lián)物)的濃度。珠子濃度的選擇取決于幾個(gè)相互競(jìng)爭(zhēng)的因素。首先,足夠的珠子必須在場(chǎng)以從熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)中捕獲大部分目標(biāo)分析物從熱力學(xué)角度看,100μL中有20萬(wàn)個(gè)珠子,每個(gè)珠子大約有8萬(wàn)個(gè)與之結(jié)合的抗體25相當(dāng)于約0.3nM的抗體濃度,在該濃度下,抗體-蛋白平衡導(dǎo)致高捕獲效率(>70%)(D.M.R.,E.P.F.,D.C.D.,未發(fā)表工作)。

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數(shù)字ELISA測(cè)量蛋白質(zhì)濃度遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)ELISA的能力源于兩種效應(yīng):1)SiMoA對(duì)酶標(biāo)記的高度敏感性;以及2)通過(guò)數(shù)字化蛋白質(zhì)檢測(cè)可以實(shí)現(xiàn)的低背景信號(hào)。任何免疫測(cè)定的靈敏度由其靈敏度決定。檢測(cè)技術(shù)到標(biāo)簽,抗體親和力,試驗(yàn)背景,以及背景測(cè)量值的變異(%CV)27.SiMoA對(duì)酶非常敏感標(biāo)簽(圖2)為在數(shù)字ELISA中檢測(cè)亞飛摩爾濃度的標(biāo)記蛋白提供了基礎(chǔ)。也就是說(shuō),對(duì)于給定親和力的抗體,其靈敏度為免疫測(cè)定將由測(cè)定背景決定,SiMoA的高標(biāo)記靈敏度有助于降低這種背景。對(duì)照實(shí)驗(yàn)表明,數(shù)字ELISA的背景來(lái)自于檢測(cè)抗體和酶的非特異性結(jié)合(NSB)與捕獲珠表面結(jié)合(補(bǔ)充表2)。AsSiMoA相比傳統(tǒng)檢測(cè)方法具有更高的標(biāo)記靈敏度,明顯減少了檢測(cè)抗體(~1nM)和酶標(biāo)記物(1–50pM)的需要,以檢測(cè)結(jié)合事件,與傳統(tǒng)方法相比(標(biāo)記試劑濃度~10nM)。降低的標(biāo)記物濃度減少了NSB到捕獲表面,從而導(dǎo)致背景信號(hào)明顯降低。 全自動(dòng)加樣與圖像分析系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)流程自動(dòng)化,熒光信號(hào)識(shí)別,結(jié)果可靠。

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單分子酶檢測(cè)到的比較低酶分子數(shù)假設(shè)蛋白質(zhì)檢測(cè)分析的更終靈敏度為背景信號(hào)可能由非特異性相互作用產(chǎn)生。為了評(píng)估內(nèi)在敏感性,我們通過(guò)將400,000個(gè)帶有生物素的珠子與不同濃度的酶綴合物鏈霉親和素-阝-半乳糖苷酶(S阝G)混合,創(chuàng)建了具有明確酶與珠子比例的珠子群體。為了方便起見(jiàn),生物素化珠子是通過(guò)將生物素化DNA與功能化的珠子雜交提供的。互補(bǔ)DNA。[我們注意到,該實(shí)驗(yàn)不應(yīng)被視為敏感的DNA檢測(cè);該檢測(cè)的敏感性受到非特異性相互作用的限制,如補(bǔ)充圖2所示,這些相互作用發(fā)生在酶綴合物和表面結(jié)合的DNA之間。 抗體篩選芯片高效篩選抗體配對(duì),5μl 樣本即可測(cè)試多種組合,縮短研發(fā)周期。單分子檢測(cè)數(shù)字ELISA穩(wěn)定性

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參考原理:血液中單個(gè)蛋白質(zhì)分子的檢測(cè)有助于識(shí)別許多新的診斷性蛋白質(zhì)標(biāo)記物。我們報(bào)告了一種同時(shí)檢測(cè)數(shù)百至數(shù)千個(gè)單獨(dú)蛋白質(zhì)分子的方法,該方法能夠檢測(cè)到非常低濃度的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)被捕獲在顯微珠上,并用酶標(biāo)記,每個(gè)顯微珠上有一個(gè)或零個(gè)酶標(biāo)記的蛋白質(zhì)。通過(guò)將這些顯微珠分離成50飛米的陣列反應(yīng)室,單個(gè)蛋白質(zhì)可以通過(guò)熒光想象檢測(cè)到。通過(guò)單化這些陣列中的分子,~10-20種酶可以在100μL(~10?19M)中檢測(cè)到。單個(gè)基于酶標(biāo)記的分子酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(數(shù)字ELISA)能夠檢測(cè)血清中臨床相關(guān)的蛋白質(zhì),其濃度(<10?15M)遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)ELISA3-5。數(shù)字ELISA在所有接受防冶性前列腺切除術(shù)的患者血清中檢測(cè)到前列腺特異性抗原,比較低至14fmol/mL(0.4fmol)。


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