這種有限的分裂能力體內(nèi)的細(xì)胞相似，一旦細(xì)胞在體內(nèi)完全分化以發(fā)揮其特殊功能，細(xì)胞將停止增殖-這是固有的保護(hù)性衰老過程。此外，某些原代細(xì)胞有絲分裂后，無論是在體內(nèi)或體外培養(yǎng)中都不增殖（例如，神經(jīng)元，骨骼肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，周細(xì)胞，終末分化的肝細(xì)胞）。因此，每次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后，原代細(xì)胞培養(yǎng)都需要再次從新鮮的組織中解離。原代細(xì)胞應(yīng)用困局：經(jīng)過一次傳代后，原代細(xì)胞培養(yǎng)物就會成為二級細(xì)胞培養(yǎng)物，也稱為細(xì)胞株。然而，盡管稱為細(xì)胞株，但其壽命是有限的（除非如前所述永生化）培養(yǎng)時間無論是酶消化法還是組織塊法。廈門原代細(xì)胞分離試劑盒產(chǎn)品介紹

原代細(xì)胞的獲取：1.培養(yǎng)時間無論是酶消化法還是組織塊法，取樣后培養(yǎng)時間較少需要一周以上的時間，期間可換液或者傳代。2.換液時間無論酶消化法還是組織塊法，在培養(yǎng)期間需要隨時關(guān)注細(xì)胞的生長狀況，需觀察其是否貼壁，是否污染，組織塊法要觀察是否有細(xì)胞遷移出來。正常情況下48~72h可換液一次。3.細(xì)胞狀態(tài)判斷正常貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)幾天后，會逐漸貼滿整個瓶底或者皿底，有的呈纖維狀，有的呈多邊形。下圖均為比較健康的原代細(xì)胞圖（左：小鼠成纖維細(xì)胞；右：雞胚成纖維細(xì)胞；下：人成纖維細(xì)胞）原代細(xì)胞分離試劑盒銷售廠家確定一種特定細(xì)胞類型在低至無血清培養(yǎng)基中正常生長和功能所需的較低條件。

細(xì)胞凍存：通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓Ｔ?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細(xì)胞。正常的原代細(xì)胞培養(yǎng)，在無污染的情況下，建議培養(yǎng)基中不加抗體，抗體會影響細(xì)胞的某些基因變異從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)有差異，所以cellsystems的細(xì)胞在分離提取時就考慮到這點(diǎn)，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細(xì)胞達(dá)到95%以上的純度，這樣得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確

原代細(xì)胞培養(yǎng)問題：1、細(xì)胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基這取決于細(xì)胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。2、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎？這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長性能的改變。3、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基？我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù)。

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項及常見問題解答：1、培養(yǎng)基的選擇依細(xì)胞種類而定。如果是從別的實(shí)驗(yàn)室借來的細(xì)胞，較初階段一定要保持細(xì)胞原有的培養(yǎng)條件；特殊種類的細(xì)胞，比如內(nèi)皮細(xì)胞，可以借鑒網(wǎng)上培養(yǎng)成功的條件，添加一些特定成分。2、液體培養(yǎng)基的保存條件應(yīng)是冰箱4度冷藏。小六兒見過有的大實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞量多，一次性購買的培養(yǎng)基瓶數(shù)也多，有些人可能覺得-20冰箱保存時間會更久一些。但是經(jīng)過冷凍后的培養(yǎng)基再溶化時，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的顏色發(fā)生變化，顏色變深，這就是培養(yǎng)基的PH值升高了。3、培養(yǎng)基中都含有大量的谷氨酰胺，用來合成細(xì)胞生長所需要的核酸和蛋白質(zhì)。但是谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定，保存4周后的培養(yǎng)基需要重新加入谷氨酰胺。所以盡量不要大批量購買培養(yǎng)，也不要一次配太多的培養(yǎng)基盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。寧波長沙原代細(xì)胞分離試劑盒

給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時要注意不要吸出細(xì)胞。廈門原代細(xì)胞分離試劑盒產(chǎn)品介紹

原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)：由于每種原代細(xì)胞培養(yǎng)的條件迥異，而且每個實(shí)驗(yàn)室都摸索出自己的培養(yǎng)條件，而對于一個特定的組織塊，所用培養(yǎng)條件不一樣，得出的所需細(xì)胞族群就不一樣，因?yàn)槊糠N組織塊都含有不同種類的細(xì)胞群，而每一種細(xì)胞群在所選定的培養(yǎng)條件下（比如所選蛋白分解酶的種類和條件，細(xì)胞因子的種類，基礎(chǔ)培養(yǎng)基的種類或者是培養(yǎng)時間長短）都會得出不同的結(jié)果。由于各實(shí)驗(yàn)室采取不同的培養(yǎng)條件，即使是同一塊心組織就有可能造成A實(shí)驗(yàn)室獲得30%的心肌細(xì)胞，70%其他種類細(xì)胞，而B實(shí)驗(yàn)室卻能獲得70%所需心肌細(xì)胞，30%為成纖維、脂肪等種類。這樣的話，即使是做同一項目的實(shí)驗(yàn)，就有可能得出相反的科學(xué)結(jié)論。因此，早在2004年，美國科學(xué)界就質(zhì)疑之前以原代細(xì)胞為主的科研文章，并同時提出原代細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)的概念。廈門原代細(xì)胞分離試劑盒產(chǎn)品介紹